產(chǎn)品名稱：恒河猴主要組織相容性復合體（MHC/RhLA）ELISA 試劑盒

規(guī)格：48T/96T

試劑盒組成及試劑配制 1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔） 2. 標準品（凍干品）：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,，蓋好后靜置10分鐘以上,，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為1,600 pg/ml,，將其稀釋為400 pg/ml后,，再做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別稀釋成400 pg/ml,，200 pg/ml,，100 pg/ml，50 pg/ml,，25 pg/ml,，12.5 pg/ml，6.25 pg/ml,，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,，臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制200 pg/ml標準品：取0.5ml （不要少于0.5ml ） 400 pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,，混勻即可,，其余濃度以此類推。3. 樣品稀釋液：1×20ml。4. 檢測稀釋液A：1×10ml,。5. 檢測稀釋液B：1×10ml,。6. 檢測溶液A：1×120μl（1:100）臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（100μl/孔）,，實際配制時應多配制0.1-0.2ml,。如10μl檢測溶液A加990μl檢測稀釋液A的比例配制，輕輕混勻,，在使用前一小時內(nèi)配制,。7. 檢測溶液B：1×120μl/瓶（1:100）臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A,。8. 底物溶液：1×10ml/瓶,。 9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍,。 10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）,。 11. 覆膜：5張12. 使用說明書：1份 自備物品 1. 酶標儀（建議參考儀器使用說明提前預熱） 2. 微量加液器及吸頭，EP管3. 蒸餾水或去離子水,，全新濾紙 標本的采集及保存 1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融,。2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,，或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融。3. 其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融,。4. 樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋5,000倍,。注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存,，-20℃不應超過1個月,，-80℃不應超過2個月；標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。 操作步驟實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）,；試劑或樣品稀釋時,，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,，如樣品濃度過高時,，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù),。1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔,、待測樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,，余孔分別加標準品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜,，37℃反應120分鐘,。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液,。2. 棄去液體，甩干,，不用洗滌,。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘,。3. 溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體,，甩干，洗板3次,，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。 4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘,。5. 溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。6. 依序每孔加底物溶液90μl,，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）。7. 依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應,，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結(jié)果的準確性,，底物反應時間到后應盡快加入終止液。8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）,。 在加終止液后立即進行檢測,。 注：1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑,。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,，避免交叉污染。2. 加樣：加樣或加試劑時,，請注意在吸取標本 / 標準品,，酶結(jié)合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,，將會導致不同的 “預孵育”時間,，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）控制在10分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用多道移液器加樣。3. 孵育：為防止樣品蒸發(fā),，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā),；洗板后應盡快進行下步操作,，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。4. 洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標儀讀數(shù),。5. 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。標準品、檢測溶液A工作液,、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆,。請精確配置標準品及工作液,，盡量不要微量配置（如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl）,，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差,；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液,。6. 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如,，每隔10分鐘），如顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。7. 底物：底物請避光保存,，在儲存和溫育時避免強光直接照射,。 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性,。 如標本中待測物質(zhì)含量過高,，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù),。 洗板方法1. 手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次,；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘,，根據(jù)需要,，重復此過程數(shù)次。2. 自動洗板：如果有自動洗板機,，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。 計算 以標準物的濃度為縱坐標（對數(shù)坐標），OD值為橫坐標（對數(shù)坐標）,，在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線,。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。 代檢測服務(wù)購買本公司目錄任何一種檢測試劑盒,，都可提供代檢測服務(wù)，您只需將需要檢測的動物（Human,Rat,Mouse,Rabbit,Monkey, Pig……）種類和檢測指標（介素類,、因子類）及標本數(shù)量（48T/96T）通知公司業(yè)務(wù)員即可,。在接到客戶標本當日起，現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測報告交到客戶手中,！ ◇ 注意事項：收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定,。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4℃備用,，如有特殊原因需要周期收集標本,，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融,。標本2-8℃可保存48小時,，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月,。部分激素類標本需添加抑肽酶,。 ◇ 液體類標本標本必須為液體，不含沉淀,。包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積＝100ul×檢測種類,。取材前須向銷售人員索要說明書,。 ◇ 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。收集上清,。如有沉淀形成，應再次離心,。 ◇ 血漿：應根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％（v/v）抗凝劑（0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2）混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,。如有沉淀形成，應再次離心,。 ◇ 尿液,、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清。如有沉淀形成,，應再次離心,。 ◇ 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。 ◇ 組織標本：切割標本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）,。用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清置于-20度或- 70度保存,，如有必要，可以將樣品濃縮干燥,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用。 寄標本時需注明以下情況：　　1,、標本編號,；2,、所測項目；3,、是否做復孔,；3、,；4,、實驗后標本是否寄回。