慧穎生物提供優(yōu)質(zhì)血清,為實驗助力,!
Gemini900-108胎牛血清
把細胞養(yǎng)好的三個關鍵要素是:良好的細胞來源,,正確的實驗操作,以及合適的培養(yǎng)體系,。其中“合適的培養(yǎng)體系”就是要創(chuàng)造適合細胞生長的環(huán)境,,給細胞建立一個滿意的“家”,而胎牛血清就好比于這個家的裝修,,可以提高細胞的居住環(huán)境和舒適性,,讓細胞更好更快地生長
當然,胎牛血清并不是完美的,,它除了可為細胞提供生長所必須的蛋白,、細胞因子、激素和微量元素等多種營養(yǎng)物質(zhì),,同時也含有內(nèi)毒素,、補體、抗體等對細胞生長有危害的成分,,若選擇不當,,不合適的FBS會嚴重影響細胞的生長狀態(tài)甚至導致細胞死亡。因此,,F(xiàn)BS既是讓細胞快樂成長的*營養(yǎng)物,,又是可能導致細胞死亡的“定時の炸的啊彈”!辛苦養(yǎng)起來的細胞可能因為FBS用錯而一切歸零……
近年來無血清培養(yǎng)基和非動物來源的培養(yǎng)基越來越受到關注,,但目前大部分細胞還無法適用這些培養(yǎng)基,,并且存在費用較高和細胞生長較緩慢的缺點,因此,,含有FBS的*培養(yǎng)基仍然是目前主流的細胞培養(yǎng)體系,。
那么,應如何為你的細胞選購FBS呢,?選購FBS應考慮哪些標準,?
1.產(chǎn)品檢測
每款FBS在生產(chǎn)上市之前,必須經(jīng)過嚴格的質(zhì)控檢測,。
質(zhì)控環(huán)節(jié)*,,以確保上市的血清符合規(guī)定合乎規(guī)格,,而血清產(chǎn)品分析證書(COA)就是FBS質(zhì)控的重要體現(xiàn)。在COA中,,常規(guī)的檢測指標包括內(nèi)毒素,、總蛋白、細菌,、病毒等,,例如我國藥典規(guī)定,F(xiàn)BS中內(nèi)毒素含量應≤10EU/mL,,另外總蛋白為30-50mg/mL,、血紅蛋白檢測不高于30mg/dL。
2. 可追溯性
目前市面上存在較多以假亂真的FBS產(chǎn)品,,科研工作者對血清的真實產(chǎn)地,、來源難以鑒別。
血清行業(yè)協(xié)會(ISIA)實施了供應鏈可追溯性的行業(yè)標準,,以確保FBS的質(zhì)量和安全性,。
例如,F(xiàn)BS供應商是否保留原產(chǎn)地的可追溯記錄,?是否持有血清生產(chǎn)各階段處理,、運輸和商業(yè)交易的文件?這些都是判斷FBS可追溯性需要考慮的因素,。
3. 生長驗證
我們使用FBS目的是為了讓細胞更真實,、健康地生長。在確保了FBS的來源真實性,、安全可靠性后,,下一步就要對FBS的質(zhì)量,即培養(yǎng)細胞的效果進行鑒定了,,而這也是決定細胞能否養(yǎng)好的關鍵,。
在細胞培養(yǎng)過程,質(zhì)量粗糙的FBS可能會導致細胞出現(xiàn)生長速度緩慢,、不貼壁,、容易老化等現(xiàn)象,從而導致實驗受阻,。經(jīng)過質(zhì)量驗證的FBS,,則可以十分確定這款FBS對哪些細胞具有良好的培養(yǎng)效果,進而判斷其能否把自己的細胞養(yǎng)好,。對于質(zhì)量優(yōu)質(zhì)的FBS,,通常采用血清敏感性細胞(如干細胞)來進行培養(yǎng)驗證,若培養(yǎng)效果良好,則其他常規(guī)細胞系的培養(yǎng)就更不在話下,。
4. 穩(wěn)定性
FBS作為其他行業(yè)的副產(chǎn)品,,其生產(chǎn)在本質(zhì)上會受到天氣、食物供應,、經(jīng)濟條件和牛群規(guī)模及疫情等各種因素的影響,,導致血清的供應可能出現(xiàn)貨源、價格及批次間的不穩(wěn)定性,,從而造成實驗的不順甚至實驗失敗,。在過去,國內(nèi)外已有多個實驗室出現(xiàn)過因血清批間差異大而導致實驗結果無法重復的情況,,浪費了巨大的時間和金錢成本,。
因此,,找到穩(wěn)定提供同批次FBS的供應商,,對于確保自己細胞實驗結果的真實性和可重復性具有重要意義,而且花在重復實驗或檢驗新批次上的時間將大大減少,。
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實驗室操作中要注意及處理方法:
1. 血清保存: 建議血清應保存在-5℃至-2O℃,。然而,若存放于4℃時,,請勿超過一個月,。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),,再放回冷凍,。
2. 解凍血清的方法: 建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,,然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻,。
3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),,該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,,并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,,因為它可能會阻塞您的過濾膜,。
4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng),。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,,細胞和血小板釋放組胺,,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,,培養(yǎng)ES細胞,,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清,。
5. Gemini血清有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,,而造成細胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,,而把血清放在37℃環(huán)境中,,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增,。
因此我們建議您,,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步,。如此一來,,不但節(jié)省您寶貴的時間,更確保血清的質(zhì)量!
6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?
胎牛血清沒有預老化,,儲存在2-8℃時,,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。這應該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,,避免反復凍融,。
7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
解凍Gemini血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),,實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。
解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,,使溫度及成分均一,,減少沉淀的發(fā)生。
請勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久,,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,,而影響血清的質(zhì)量,。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,,可以無須做此步驟,。
若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,,30分鐘的原則,,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多