FRTL-5細(xì)胞|大鼠正常甲狀腺細(xì)胞 培養(yǎng)

產(chǎn)品名稱：FRTL-5細(xì)胞

中文名稱：大鼠正常甲狀腺細(xì)胞

生長狀態(tài)：貼壁生長

培養(yǎng)條件：DMEM（高糖） +10% 德國SERANA胎牛血清（建議）

供應(yīng)商：上?；鄯f生物科技有限公司

FRTL-5細(xì)胞|大鼠正常甲狀腺細(xì)胞 培養(yǎng)

慧穎生物公司專業(yè)提供美國ATCC細(xì)胞庫來源正常細(xì)胞系,、腫瘤細(xì)胞系,、癌細(xì)胞系（三千多種），提供細(xì)胞株生物體,、生長特性,、來源、器官,、類型,、形態(tài)、培養(yǎng)條件,、應(yīng)用,、系、疾病,、組織,、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說明書信息，我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗,，能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的,，讓您實驗再無煩擾！

1,、收到細(xì)胞,，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出,，是否渾濁,，如有請盡快。

2,、收到細(xì)胞,，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞,。,由于運輸過程中的問題,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時,，請不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，先不要把培養(yǎng)基吸出來。應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右,，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細(xì)胞會重新貼附于瓶壁,。如細(xì)胞仍不能貼壁,，請用臺盼藍染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺盼藍染色證實細(xì)胞活力正常請按懸浮細(xì)胞的方法處理

3. 收到細(xì)胞時如無異常情況 ,，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度,，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時,，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水,。噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作：然后打開蓋子,，先用槍頭把培養(yǎng)基吸出10ML左右,，放在離心管里，然后瓶口過火,，（嚴(yán)禁直接傾倒）,，這樣可以保證不污染，再用10ML的移液管,，將剩余的培養(yǎng)基全部吸出,，放于離心管中，培養(yǎng)瓶中只剩余5-10ML左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了）：超過80%匯合度時,，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。

如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液,，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3-5分鐘,，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶,。

4,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松,。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,，存放于4℃冰箱，以備不時之需,。第二天換液時,，要配制新鮮的培養(yǎng)基和進口胎牛血清,。這樣對細(xì)胞生長更好。不要再用我們原瓶的培養(yǎng)基了,。

5 ,、24小時后，細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,，就可以傳代了。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,，加3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去,。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),，一般1-3分鐘,，不超過5分鐘?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化,。輕輕晃動瓶壁，見細(xì)胞脫落下來,，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化,。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落,，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,，1000rpm/5min。棄上清,，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三,，有些細(xì)胞不易傳得過稀,，有些生長較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗為準(zhǔn),。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁,，直接將溶液吸入離心管離心即可。

6,，貼壁細(xì)胞 ,，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作,。換液時,，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液和進口胎牛血清，37度    5%CO2 培養(yǎng)

7.  收到細(xì)胞后,，請鏡下觀察細(xì)胞,，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請離心收集細(xì)胞,，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中,。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基,，使用進口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞,，若細(xì)胞不多時 血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ,，血清濃度還是在10％,。

FRTL-5細(xì)胞|大鼠正常甲狀腺細(xì)胞 培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)條件

1，1640培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11875093） +10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+2mM  L-G(L-谷氨酰胺)+1mM  Sodium pyruvate+10mM   HEPES(gibco.,。貨號,。15630-080)

2,DMEM高糖培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11995065）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+4mM  L-G(L-谷氨酸胺)+1mM （丙酮酸鈉1,HEPES(gibco.。貨號,。15630-080)

3,E,MEM培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11095080）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+NEAA(非必需氨基酸)+2mM  L-G(L-谷氨酸胺)+1mM （丙酮酸鈉）

4,，F(xiàn)12K培養(yǎng)基 （GIBCO,貨號11765054）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+2mM  L-G(L-谷氨酸胺)

5，McCoy's 5a培養(yǎng)基（GIBCO,貨號16600082）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

6 . L 15培養(yǎng)基（Hyclone,貨號SH30525.01）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

7. DMEM/F12培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11330032）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

8. IMDM培養(yǎng)基（GIBCO,貨號C12440500BT）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

2, L-G(L-谷氨酸胺),。L-Glutamine 200mM  (GIBCO,。貨號25030-081)

3,NEAA(非必需氨基酸).(GIBCO。貨號11140-050)

4..sodium.pyruvate  (GIBCO,。貨號11360-070)  

100ML 1640*培養(yǎng)基配法
1640培養(yǎng)基   86ML 

 FBS 血清        10ML      

 L-谷氨酸胺,。100X  1ML
丙酮酸鈉  100X        1ML

HEPES(1M) 10mM  1ML  

抗菌素（青、鏈霉素） 1ML