關(guān)鍵詞：慧穎生物提供高品質(zhì)SCC-25細(xì)胞,，低價(jià)格SCC-25細(xì)胞,，狀態(tài)良好，傳代次數(shù)靠前,，*,！

產(chǎn)品名稱：SCC-25細(xì)胞

中文名稱：人舌癌細(xì)胞

規(guī)格：凍存管/25T培養(yǎng)瓶

貨期：10個(gè)工作日左右

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)支原體，無(wú)污染

上?；鄯f生物提供4000多種類細(xì)胞株細(xì)胞系,，從源頭把控產(chǎn)品的可靠性，復(fù)蘇,，凍存,，傳代，培養(yǎng),，嚴(yán)格無(wú)菌操作,，全國(guó)各地均可發(fā)貨，遠(yuǎn)到香港,，澳門,，內(nèi)蒙古，新疆石河子,，寧夏,，海南等地,，全國(guó)訂購(gòu)：！

原代細(xì)胞培養(yǎng)成功以后,，需要進(jìn)行分離培養(yǎng),，否則細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過(guò)大，營(yíng)養(yǎng)障礙,，影響細(xì)胞生長(zhǎng),。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過(guò)程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞允許培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株),，可以進(jìn)行細(xì)胞克隆,，易于保存，但可能喪失一些特殊的細(xì)胞和分化特征,。傳代SCC-25細(xì)胞,，低價(jià)格SCC-25細(xì)胞形成細(xì)胞株的zui大利處在于提供了大量持久的實(shí)驗(yàn)材料，便于實(shí)驗(yàn),。1. 操作步驟（1）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,。（2）向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜,。（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進(jìn)行消化,，2~5min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮,、細(xì)胞間隙增大后,，應(yīng)立即中止消化。（4）吸出消化液,，向瓶?jī)?nèi)加入Hanks液少量,，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉,，然后再加培養(yǎng)液,。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后,，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液,，終止消化。（5）使用彎頭吸管,，吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液,，按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液,。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔,，以防用力過(guò)猛損傷細(xì)胞。（6）用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后,，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中,，置CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),。（7）細(xì)胞培養(yǎng)換液時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)要求來(lái)確定。一般2～3d后應(yīng)換一次生長(zhǎng)液,。待細(xì)胞鋪滿器皿底面,，即可使用,；也可繼續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)或換成維持液,。2. 注意事項(xiàng)（1）掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短時(shí),，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落,，過(guò)長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷,。（2）掌握好消化濃度,，當(dāng)消化液濃度過(guò)高時(shí)，消化時(shí)間應(yīng)縮短,，過(guò)低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng),。三、體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)及其操作步驟1． 瘤細(xì)胞懸液接種（1）無(wú)菌選取生長(zhǎng)良好(有光澤,，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長(zhǎng)期培養(yǎng)瘤細(xì)胞,。   （2）在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過(guò)濾成細(xì)胞懸液,。（3）培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用PBS洗兩遍,。（4）計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度至107～108／ml。（5）常規(guī)消毒后,，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細(xì)胞懸液(0.1ml／部位,，＞106細(xì)胞)。初次接種成功率低,，細(xì)胞數(shù)盡可能多一些,。（6）次日注意觀察動(dòng)物一般情況。初次接種一般有一段較長(zhǎng)的潛伏期,，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短,，zui后固定為一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的時(shí)間。2． 腹水瘤的建立與腹水瘤的接種　將實(shí)體瘤細(xì)胞直接種于小鼠腹腔,、腹壁或其他部位,，引起腹水，腹水中含有瘤細(xì)胞,，將這種腹水反復(fù)傳代,，即可成為腹水瘤。初次傳代時(shí),，腹水常呈血性(含大量紅細(xì)胞),，反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色,。腹水瘤的接種過(guò)程如下。（1）將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細(xì)胞離心和洗滌,，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。（2）消毒動(dòng)物，左下腹穿刺接種106腹水瘤細(xì)胞,。（3）接種腹水瘤細(xì)胞后約7~12d,，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,，用9號(hào)針頭抽取腹水,，也可行腹部解剖后，用滴管吸取,。每只小鼠可抽3~5ml,。（4）抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清,，分裝凍存?zhèn)溆?。四、培養(yǎng)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù),。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中,，儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融,。1． 凍存細(xì)胞（1）選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞(證明無(wú)支原體污染),，在凍存前1d換液。（2）按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液,，計(jì)數(shù),，使細(xì)胞密度達(dá)5×107／ml左右密度，離心,，去上清,。（3）加入配制好的凍存液（培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml,，DMSO 1ml,，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,，然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸,。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點(diǎn)降低,，使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外,。（4）分裝于無(wú)菌凍存管中，每管加1.5m懸液。（5）旋好凍存管并仔細(xì)檢查,，一定要蓋緊,，做好標(biāo)記。（6）凍存：在特殊的儀器或簡(jiǎn)易的液氮容器中,，按-1℃／min的速度,，在30～40min時(shí)間內(nèi)，下降到液氮表面,，再停30min后,，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度,，過(guò)快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出,，太慢則促進(jìn)冰晶形成,。操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套,，以免液氮凍傷。2. 復(fù)蘇細(xì)胞（1）從罐中取出凍存管,。（2）迅速放入36℃～37℃水浴,，不時(shí)搖動(dòng)，使其急速融化,，30～60s內(nèi)完成,。（3）凍存管用70％酒精擦拭消毒后，打開(kāi)蓋子,，用吸管將細(xì)胞懸液注入離心管中,，再滴加10ml培養(yǎng)液。（4）低速離心(500～1000r／min) 5min,，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次,。（5）用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶37℃培養(yǎng),，次日更換一次培養(yǎng)液后,，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進(jìn)行培養(yǎng),。凍存細(xì)胞數(shù)量要充分,，密度應(yīng)達(dá)到107／ml，在融后稀釋20倍時(shí),，仍能保持5×105／ml數(shù)量,。

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SUER1937(XR) ZR-75-1細(xì)胞,，導(dǎo)管癌細(xì)胞 1×106 1ml/T25 詢價(jià)/元

SUER1938(XR) ZR-75-30細(xì)胞，導(dǎo)管癌細(xì)胞 1×106 1ml/T25 詢價(jià)/元

接種或傳代以后,，實(shí)驗(yàn)者每天或至多間隔1～2d,，要對(duì)細(xì)胞做常規(guī)性檢查。觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)情況以及培養(yǎng)的pH變化,、有無(wú)污染等,。根據(jù)細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化，做換液或傳代處理,，如發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)及時(shí)采取措施,。1. 細(xì)胞形態(tài)　生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，在一般顯微鏡下觀察時(shí)可見(jiàn),，細(xì)胞透明度大,、折光性強(qiáng)、輪廓不清,。細(xì)胞生長(zhǎng)不良時(shí),，輪廓增強(qiáng)，胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡,、脂滴和其他顆粒狀物,，細(xì)胞之間空隙加大，細(xì)胞形態(tài)可變得不規(guī)則甚至失去原有特點(diǎn),，如上皮細(xì)胞變成類上皮細(xì)胞等,。某些染料當(dāng)細(xì)胞死亡時(shí)能透過(guò)變性的胞膜與解體的細(xì)胞核DNA結(jié)合，而令其著色,。因而常用臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue) 鑒別細(xì)胞死活,，活細(xì)胞不著色，死細(xì)胞核呈藍(lán)色,。2. 細(xì)胞生長(zhǎng)　初代培養(yǎng)或傳代的細(xì)胞懸液接種以后,，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)短不同的潛伏期后開(kāi)始增殖,。傳代細(xì)胞系、胚胎組織或幼體組織一般在第二天即可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng),，一周內(nèi)便可連接成片,。接種細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶壁后，應(yīng)及時(shí)做再培養(yǎng),。否則由于營(yíng)養(yǎng)物消耗和代謝積累,，細(xì)胞即進(jìn)入停止期或退化期。此時(shí)細(xì)胞輪廓增強(qiáng),，細(xì)胞內(nèi)常出現(xiàn)顆粒狀堆積物,，為膨脹的線粒體，細(xì)胞質(zhì)呈空泡化,，細(xì)胞變圓,、粗糙，嚴(yán)重時(shí)細(xì)胞從瓶壁脫落,，只有及時(shí)再做傳代處理,，才能使細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖。3. 營(yíng)養(yǎng)液　正常情況下,，培養(yǎng)液呈桃紅色,。如果細(xì)胞維持在pH6.5～6.6條件下，細(xì)胞會(huì)脫落死亡,。當(dāng)培養(yǎng)液酸化變黃時(shí),，說(shuō)明培養(yǎng)液中代謝產(chǎn)物已堆積到一定量，需要更換新鮮培養(yǎng)液,。培養(yǎng)液中如加Hepes或用5％CO2溫箱培養(yǎng)可使pH維持相對(duì)穩(wěn)定,。更換營(yíng)養(yǎng)液的時(shí)間，可依營(yíng)養(yǎng)物的消耗而定,，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛時(shí)2～3d換一次，生長(zhǎng)緩慢時(shí),，3～4d亦可,。要特別注意各種細(xì)胞對(duì)pH值要求是不一樣的。4. 微生物污染　微生物污染培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)物后會(huì)出現(xiàn)pH值改變,，培養(yǎng)液呈現(xiàn)混濁狀,。細(xì)菌感染后，由于細(xì)菌的運(yùn)動(dòng),，光鏡觀察可見(jiàn)有微閃光,；真菌感染則在鏡下見(jiàn)許多細(xì)絲狀菌絲，有時(shí)還密集有群集孢子,；支原體的污染需要借助一些檢測(cè)手段才可檢出,。細(xì)胞污染以后一般應(yīng)當(dāng)廢棄,，對(duì)于重要的細(xì)胞株,，可以參考相關(guān)專著,，介紹采取一些措施清除污染。比較重要的實(shí)驗(yàn),、珍貴的細(xì)胞,，至少由兩個(gè)實(shí)驗(yàn)人員獨(dú)立培養(yǎng)操作,，或由一個(gè)人分次(不同時(shí))操作。除培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生條件外,，空氣中的濕度與微生物污染關(guān)系密切,。重要的、周期長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)盡量安排在空氣濕度低的秋冬季進(jìn)行,。