關(guān)鍵詞：慧穎生物提供高品質(zhì)PC-3M1E8細胞,，PC-3M1E8細胞株,，狀態(tài)良好，傳代次數(shù)靠前,，*,！

產(chǎn)品名稱：PC-3M1E8細胞

中文名稱：人前列腺癌細胞高轉(zhuǎn)移亞系

規(guī)格：凍存管/25T培養(yǎng)瓶

貨期：10個工作日左右

質(zhì)量標準：無支原體，無污染

上?；鄯f生物提供4000多種類細胞株細胞系,，從源頭把控產(chǎn)品的可靠性，復(fù)蘇,，凍存,，傳代，培養(yǎng),，嚴格無菌操作,，全國各地均可發(fā)貨，遠到香港,，澳門,，內(nèi)蒙古，新疆石河子,，寧夏,，海南等地，全國訂購：,！

原代細胞培養(yǎng)成功以后,，需要進行分離培養(yǎng)，否則細胞會因生存空間不足或密度過大,，營養(yǎng)障礙,，影響細胞生長。細胞由原培養(yǎng)瓶內(nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng),。傳代細胞允許培養(yǎng)的細胞擴增(形成細胞株),，可以進行細胞克隆,，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征,。傳代PC-3M1E8細胞,，PC-3M1E8細胞株形成細胞株的zui大利處在于提供了大量持久的實驗材料，便于實驗,。1. 操作步驟（1）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,。（2）向瓶內(nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜,。（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進行消化,，2~5min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮,、細胞間隙增大后,，應(yīng)立即中止消化。（4）吸出消化液,，向瓶內(nèi)加入Hanks液少量,，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉,，然后再加培養(yǎng)液,。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后,，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液,，終止消化。（5）使用彎頭吸管,，吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液,，按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液,。吹打時動作要輕柔,，以防用力過猛損傷細胞。（6）用計數(shù)板計數(shù)后,，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中,，置CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。（7）細胞培養(yǎng)換液時間應(yīng)根據(jù)細胞生長的狀態(tài)和實驗要求來確定,。一般2～3d后應(yīng)換一次生長液,。待細胞鋪滿器皿底面，即可使用,；也可繼續(xù)傳代擴大培養(yǎng)或換成維持液,。2. 注意事項（1）掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時,，細胞不宜從瓶壁脫落,，過長的消化會導(dǎo)致細胞脫落,、損傷。（2）掌握好消化濃度,，當消化液濃度過高時,，消化時間應(yīng)縮短，過低時細胞消化時間相對延長,。三、體內(nèi)細胞培養(yǎng)及其操作步驟1． 瘤細胞懸液接種（1）無菌選取生長良好(有光澤,，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長期培養(yǎng)瘤細胞,。   （2）在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過濾成細胞懸液,。（3）培養(yǎng)細胞應(yīng)用PBS洗兩遍,。（4）計數(shù)并調(diào)整細胞濃度至107～108／ml。（5）常規(guī)消毒后,，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml／部位,，＞106細胞)。初次接種成功率低,，細胞數(shù)盡可能多一些,。（6）次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期,，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短,，zui后固定為一個相對穩(wěn)定的時間。2． 腹水瘤的建立與腹水瘤的接種　將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔,、腹壁或其他部位,，引起腹水，腹水中含有瘤細胞,，將這種腹水反復(fù)傳代,，即可成為腹水瘤。初次傳代時,，腹水常呈血性(含大量紅細胞),，反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下,。（1）將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌,，進行細胞計數(shù)。（2）消毒動物,，左下腹穿刺接種106腹水瘤細胞,。（3）接種腹水瘤細胞后約7~12d，待小鼠腹部明顯膨大,。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,，用9號針頭抽取腹水,，也可行腹部解剖后，用滴管吸取,。每只小鼠可抽3~5ml,。（4）抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清,，分裝凍存?zhèn)溆?。四、培養(yǎng)細胞的凍存及復(fù)蘇細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù),。細胞凍存在-196℃液氮中,，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融,。1． 凍存細胞（1）選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染),，在凍存前1d換液。（2）按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液,，計數(shù),，使細胞密度達5×107／ml左右密度，離心,，去上清,。（3）加入配制好的凍存液（培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml,，DMSO 1ml,，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸,。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點降低,，使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外,。（4）分裝于無菌凍存管中，每管加1.5m懸液,。（5）旋好凍存管并仔細檢查,，一定要蓋緊，做好標記,。（6）凍存：在特殊的儀器或簡易的液氮容器中,，按-1℃／min的速度，在30～40min時間內(nèi),，下降到液氮表面,，再停30min后，直接投入液氮中,。要適當掌握下降冷凍速度,，過快能影響細胞內(nèi)水分透出,，太慢則促進冰晶形成。操作時應(yīng)戴防護眼鏡和手套,，以免液氮凍傷,。2. 復(fù)蘇細胞（1）從罐中取出凍存管。（2）迅速放入36℃～37℃水浴,，不時搖動,，使其急速融化，30～60s內(nèi)完成,。（3）凍存管用70％酒精擦拭消毒后,，打開蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中,，再滴加10ml培養(yǎng)液。（4）低速離心(500～1000r／min) 5min,，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次,。（5）用培養(yǎng)液適當稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶37℃培養(yǎng),，次日更換一次培養(yǎng)液后,，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進行培養(yǎng),。凍存細胞數(shù)量要充分,，密度應(yīng)達到107／ml，在融后稀釋20倍時,，仍能保持5×105／ml數(shù)量,。

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SUER1269(XR) IGR-37細胞， 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1270(XR) IGR-39細胞， 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1271(XR) IGROV1細胞,，惡性腫瘤,，腺癌細胞 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1272(XR) IM95細胞，腸腺癌學(xué)校細胞 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1273(XR) IMR-32細胞,， 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1274(XR) IOMM-Lee細胞,， 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1275(XR) IPC-298細胞， 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1276(XR) Ishikawa (Heraklio) 02 ER-細胞,，星形細胞瘤細胞 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1277(XR) IST-MES1細胞,， 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1278(XR) IST-MES2細胞， 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1279(XR) J82細胞,，移行細胞癌細胞 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1280(XR) JeKo-1細胞,，套細胞淋巴瘤細胞 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1281(XR) JH-EsoAd1細胞，巴列特食管炎相關(guān)腺癌細胞 1×106 1ml/T25 詢價/元

SUER1282(XR) JHH-1細胞,，肝癌細胞 1×106 1ml/T25 詢價/元

PC-3M1E8細胞,，PC-3M1E8細胞株接種或傳代以后，實驗者每天或至多間隔1～2d,，要對細胞做常規(guī)性檢查,。觀察細胞形態(tài)和生長情況以及培養(yǎng)的pH變化、有無污染等,。根據(jù)細胞動態(tài)變化,，做換液或傳代處理，如發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)及時采取措施,。1. 細胞形態(tài)　生長狀態(tài)良好的細胞,，在一般顯微鏡下觀察時可見，細胞透明度大,、折光性強,、輪廓不清。細胞生長不良時,，輪廓增強,，胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物,，細胞之間空隙加大,，細胞形態(tài)可變得不規(guī)則甚至失去原有特點，如上皮細胞變成類上皮細胞等,。某些染料當細胞死亡時能透過變性的胞膜與解體的細胞核DNA結(jié)合,，而令其著色。因而常用臺盼藍(trypan blue) 鑒別細胞死活,，活細胞不著色,，死細胞核呈藍色,。2. 細胞生長　初代培養(yǎng)或傳代的細胞懸液接種以后，經(jīng)過長短不同的潛伏期后開始增殖,。傳代細胞系,、胚胎組織或幼體組織一般在第二天即可見細胞生長，一周內(nèi)便可連接成片,。接種細胞長滿瓶壁后,，應(yīng)及時做再培養(yǎng)。否則由于營養(yǎng)物消耗和代謝積累,，細胞即進入停止期或退化期,。此時細胞輪廓增強，細胞內(nèi)常出現(xiàn)顆粒狀堆積物,，為膨脹的線粒體,，細胞質(zhì)呈空泡化，細胞變圓,、粗糙,，嚴重時細胞從瓶壁脫落，只有及時再做傳代處理,，才能使細胞繼續(xù)生長繁殖,。3. 營養(yǎng)液　正常情況下，培養(yǎng)液呈桃紅色,。如果細胞維持在pH6.5～6.6條件下,，細胞會脫落死亡。當培養(yǎng)液酸化變黃時,，說明培養(yǎng)液中代謝產(chǎn)物已堆積到一定量,，需要更換新鮮培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中如加Hepes或用5％CO2溫箱培養(yǎng)可使pH維持相對穩(wěn)定,。更換營養(yǎng)液的時間,，可依營養(yǎng)物的消耗而定，細胞生長旺盛時2～3d換一次,，生長緩慢時,，3～4d亦可。要特別注意各種細胞對pH值要求是不一樣的,。4. 微生物污染　微生物污染培養(yǎng)細胞培養(yǎng)物后會出現(xiàn)pH值改變,，培養(yǎng)液呈現(xiàn)混濁狀,。細菌感染后,，由于細菌的運動，光鏡觀察可見有微閃光,；真菌感染則在鏡下見許多細絲狀菌絲,，有時還密集有群集孢子,；支原體的污染需要借助一些檢測手段才可檢出。細胞污染以后一般應(yīng)當廢棄,，對于重要的細胞株,，可以參考相關(guān)專著，介紹采取一些措施清除污染,。比較重要的實驗,、珍貴的細胞，至少由兩個實驗人員獨立培養(yǎng)操作,，或由一個人分次(不同時)操作,。除培養(yǎng)實驗室的衛(wèi)生條件外，空氣中的濕度與微生物污染關(guān)系密切,。重要的,、周期長的實驗盡量安排在空氣濕度低的秋冬季進行。