上海EA.hy926人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞株

簡寫：EA.hy926,；EA.hy926細(xì)胞，人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞,，人臍靜脈融合細(xì)胞

細(xì)胞介紹：在PEG脅迫下,，將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細(xì)胞與抗硫鳥嘌呤的A549克隆株融合，構(gòu)建了人臍靜脈細(xì)胞株, EA.hy926,。 融合子在HAT培養(yǎng)基上生長并以八因子相關(guān)抗原篩選,。 EA.hy926已經(jīng)過100次以上的群體倍增(PDLs)。電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細(xì)胞質(zhì)分布以及組織特異性的細(xì)胞器,，分化的內(nèi)皮細(xì)胞特性如血管生成,，體內(nèi)平衡/血栓形成，血壓及炎癥反應(yīng),。

細(xì)胞特性

1） 來源：靜脈內(nèi)皮細(xì)胞與A549細(xì)胞株融合

2） 形態(tài)：梭形,，貼壁生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞,。收到細(xì)胞后，可在1000RPM,，常溫條件下,，離心5min后,，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H，GIBCO,，貨號12800017,，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%,；胎牛血清,，10%。（DMEM液體培養(yǎng)基：GIBCO,，11995-065）,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)隔夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)隔夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。

注意事項(xiàng)：

1.收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們 王 .

2.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

以上為上海EA.hy926人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞株,；相關(guān)簡介,，由上海慧穎生物提供,，供應(yīng)EA.hy926的價格,、說明書以及技術(shù)咨詢！

品牌相關(guān)細(xì)胞庫索引（部分）

上海HUV-EC細(xì)胞人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 1×106  1ml/T75

上海HPASMC細(xì)胞人肺動脈平滑肌細(xì)胞   1×106  1ml/T75

上海EA.hy926細(xì)胞人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞   1×106  1ml/T75

上海HUV-EC-C細(xì)胞人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞   1×106  1ml/T75

上海PUMC-HUVEC-T1細(xì)胞SV40T轉(zhuǎn)化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 1×106  1ml/T75

上海ECV-304 [ECV304,；ECV 304]細(xì)胞人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞  1×106  1ml/T75

上海HuUVECs-11細(xì)胞臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞   1×106  1ml/T75

上海HPAEC細(xì)胞人肺動脈內(nèi)皮細(xì)    1×106  1ml/T75

上海HASMC細(xì)胞人主動脈平滑肌細(xì)胞    1×106  1ml/T75

上海HMEC-1細(xì)胞人微血管內(nèi)皮細(xì)胞株   1×106  1ml/T75

上海HBVSMC細(xì)胞人腦微血管平滑肌細(xì)胞 1×106  1ml/T75

上海HDMEC細(xì)胞人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞  1×106  1ml/T75

上海HPMEC細(xì)胞人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞    1×106  1ml/T75

初學(xué)者易犯錯誤：

1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃,。

2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導(dǎo)致傳熱不佳,，使融化時間延長,。

3.離心前忘記平衡,，導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。

4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過多,，忘記更換吸頭和吸管,，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。