上海EA.hy926人臍靜脈細胞融合細胞株

簡寫：EA.hy926,；EA.hy926細胞,，人臍靜脈細胞融合細胞,，人臍靜脈融合細胞

細胞介紹：在PEG脅迫下，將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細胞與抗硫鳥嘌呤的A549克隆株融合,，構建了人臍靜脈細胞株, EA.hy926,。 融合子在HAT培養(yǎng)基上生長并以八因子相關抗原篩選。 EA.hy926已經過100次以上的群體倍增(PDLs),。電鏡照片顯示Weibel-Palade小體的細胞質分布以及組織特異性的細胞器,，分化的內皮細胞特性如血管生成，體內平衡/血栓形成,，血壓及炎癥反應,。

細胞特性

1） 來源：靜脈內皮細胞與A549細胞株融合

2） 形態(tài)：梭形，貼壁生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體,、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：使用含有優(yōu)質胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后,，可在1000RPM,，常溫條件下，離心5min后,，于潔凈操作臺棄去上清,，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

細胞用途：僅供科研使用,。

細胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H,，GIBCO，貨號12800017,，添加NaHCO3 1.5g/L),，90%,；胎牛血清,，10%。（DMEM液體培養(yǎng)基：GIBCO,，11995-065）,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現用現配,。液氮儲存,。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)隔夜（或將細胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)隔夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存。

注意事項：

1.收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染，請立即與我們 王 .

2.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內操作,，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

以上為上海EA.hy926人臍靜脈細胞融合細胞株,；相關簡介，由上?；鄯f生物提供,，供應EA.hy926的價格、說明書以及技術咨詢,！

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初學者易犯錯誤：

1水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。

2.水浴鍋內凍存管太多,，導致傳熱不佳,，使融化時間延長。

3.離心前忘記平衡,，導致離心機損壞和細胞丟失,。

4.一次復蘇細胞過多，忘記更換吸頭和吸管,，導致細胞交叉污染,。