L929細(xì)胞,，小鼠成纖維細(xì)胞株

公司所提供的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及其子代，不能用于人體實(shí)驗(yàn)和臨床診斷,、治療,。

細(xì)胞狀態(tài)不好解決方法：培養(yǎng)基一次不要配太多，根據(jù)用量決定,。

細(xì)胞外源微生物的污染：細(xì)胞不宜長(zhǎng)期體外培養(yǎng),，因?yàn)橥庠次⑸镂廴镜膸茁蚀蟠筇岣摺Ｒ装l(fā)現(xiàn)和難發(fā)現(xiàn)的,，影響細(xì)胞狀態(tài),。

建議：實(shí)驗(yàn)前凍存一批細(xì)胞，隔幾個(gè)月重新復(fù)蘇,。既保證實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞代數(shù)*,，又將外源污染的后果降到zui低。

致電或電聯(lián) 咨詢L929細(xì)胞的傳代次數(shù),、報(bào)價(jià),、以及技術(shù)咨詢、L929細(xì)胞的說(shuō)明書(shū)等等,。

相關(guān)培養(yǎng)液原料（）

1640培養(yǎng)基（GIBCO,貨號(hào)11875093） +10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號(hào)10099141）+2mM  L-G(L-谷氨酰胺)+1mM  Sodium pyruvate+10mM   HEPES(gibco.,。貨號(hào)。15630-080)

DMEM高糖培養(yǎng)基（GIBCO,貨號(hào)11995065）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號(hào)10099141）+4mM  L-G(L-谷氨酸胺)+1mM （丙酮酸鈉1,HEPES(gibco.,。貨號(hào),。15630-080)

E,MEM培養(yǎng)基（GIBCO,貨號(hào)11095080）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號(hào)10099141）+NEAA(非必需氨基酸)+2mM  L-G(L-谷氨酸胺)+1mM （丙酮酸鈉）

F12K培養(yǎng)基 （GIBCO,貨號(hào)11765054）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號(hào)10099141）+2mM  L-G(L-谷氨酸胺)

McCoy's 5a培養(yǎng)基（GIBCO,貨號(hào)16600082）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號(hào)10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

L 15培養(yǎng)基（Hyclone,貨號(hào)SH30525.01）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號(hào)10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

DMEM/F12培養(yǎng)基（GIBCO,貨號(hào)11330032）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號(hào)10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

IMDM培養(yǎng)基（GIBCO,貨號(hào)C12440500BT）+10%進(jìn)口胎牛血清（GIBCO,貨號(hào)10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

L929細(xì)胞，小鼠成纖維細(xì)胞株 步驟：

（一）凍存

1,、消化細(xì)胞（同實(shí)驗(yàn)二）,，將細(xì)胞懸液收集至離心管中。

2,、1000rpm離心10分鐘,，棄上清液。

 3,、沉淀加含保護(hù)液的培養(yǎng),，計(jì)數(shù)，調(diào)整至5×106/ml左右,。

4,、將懸液分至凍存管中，每管1 ml,。 

5,、將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口，封口一定要嚴(yán),，否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂,。

6、貼上標(biāo)簽,，寫(xiě)明細(xì)胞種類,，凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩,。 

7,、按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘〕→冰箱冷凍室（30分鐘）→低溫冰箱（－30℃ 1小時(shí)）→氣態(tài)氮（30分鐘）→液氮。 

注意：操作時(shí)應(yīng)小心,，以免液氮凍傷,。液氮定期檢查，隨時(shí)補(bǔ)充,，不能揮發(fā)干凈,，一般30立升的液氮能用1～1.5月。

（二）復(fù)蘇 

1,、準(zhǔn)備一個(gè)茶缸或1000ml的燒壞,，內(nèi)裝2/3杯37℃的溫水。 

2,、從液氮中取出凍存管,、迅速置于溫水中并不斷攪動(dòng)。使凍存管中的凍存物在1分鐘之內(nèi)融化,。 3,、打開(kāi)凍存管，將細(xì)胞懸液吸到離心管中,。 4,、1000rpm離心10分鐘，棄去上清液,。 

5,、沉淀加10ml培養(yǎng)液，吹打均勻,，再離心10分鐘,，棄上清液。 

6,、加適當(dāng)培養(yǎng)基后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,，37℃培養(yǎng)，第二天觀察生長(zhǎng)情況,。

L929細(xì)胞，小鼠成纖維細(xì)胞株 相關(guān)主要產(chǎn)品:

鵪鶉?yán)w維肉瘤細(xì)胞株QT6

小鼠骨髓瘤B淋巴細(xì)胞株SP2/MIL-6

小鼠胰腺癌細(xì)胞株LTPA

小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝株P(guān)T-67

小鼠淋巴瘤細(xì)胞株L5178YTK+/-clone3.7.2C

小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MA-891

小鼠胃癌細(xì)胞株MFC

鼠肝癌細(xì)胞株MM45T.Li

小鼠肝癌細(xì)胞株Hepa1-6

小鼠胸腺瘤細(xì)胞株EL4

小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞株9L

小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞株RAW264.7

小鼠肝癌細(xì)胞株hepA1-6

小鼠垂體瘤細(xì)胞株AtT20

小鼠乳腺癌細(xì)胞株C127

大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6-121

大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6-1752

大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6-64

大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6-70

大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6-D2B

小鼠肺癌Lewis瘤株

小鼠肺腺癌細(xì)胞株LA795

小鼠胰腺腺泡細(xì)細(xì)胞株MPC-83

小鼠胰腺腺泡細(xì)胞株MPC-83瘤株

小鼠β胰島素瘤細(xì)胞株RIN-m5F

小鼠乳腺癌細(xì)胞株MA891

小鼠自發(fā)高乳腺癌細(xì)胞株TA2

小鼠宮頸癌細(xì)胞株U14

小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株G422

小鼠腹水瘤S180瘤株

小鼠白血病細(xì)胞株C3

小鼠淋巴瘤細(xì)胞株YAC-1

小鼠肺上皮細(xì)胞株TC-1

大鼠肉瘤細(xì)胞株WistarW256

小鼠巨噬細(xì)胞株Ana-1

小鼠小膠質(zhì)瘤細(xì)胞株Bv-2

大鼠胰島素瘤細(xì)胞株INS-1

大鼠肺泡巨噬細(xì)胞株NR8383

小鼠單核巨噬細(xì)胞株J774A.1

大鼠胰腺癌細(xì)胞株DSL-6A/C1

L929細(xì)胞，小鼠成纖維細(xì)胞株 試劑和器材 

器材：液氮罐,、凍存管（塑料螺口凍存管或安瓿瓶）,、離心管、吸管,、離心機(jī)等 試劑：0.25％胰酶,、培養(yǎng)基、含保護(hù)劑的培養(yǎng)基（即凍存液） 凍存液配制： 培養(yǎng)基加入甘油或DSMO,，使其終濃度達(dá)5—20%,。保護(hù)劑的種類和用量視不同細(xì)胞而不同。配好后4℃下保存,。