人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒

使用范圍：僅供科研檢測，不得用于臨床,。

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特點(diǎn)：靈敏性高、特異性強(qiáng),、重復(fù)性好

服務(wù)：慧穎生物所有的elisa試劑盒均免費(fèi)代測,，全程Elisa實(shí)驗技術(shù)指導(dǎo)，免費(fèi)代做實(shí)驗。

人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒

實(shí)驗原理：

用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體,，往包被抗ITF抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗ITF抗體,、HRP標(biāo)記的親和素,，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的ITF呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，計算樣品濃度,。

操作步驟：

實(shí)驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時,，均需混勻，混勻時盡量避免起泡,。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍,。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，37℃反應(yīng)120分鐘,。

為保證實(shí)驗結(jié)果有效性，每次實(shí)驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。

1. 棄去液體,，甩干，不用洗滌,。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,，輕輕混勻,，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘,。
2. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔,，甩干。
3. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl,，37℃,，60分鐘。
4. 溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體,，甩干，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔，甩干,。
5. 依序每孔加底物溶液90μl,，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）。
6. 依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液,。
7. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測,。

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