會(huì)員.png)
14
大鼠同型半胱氨（HCY）ELISA試劑盒檢測(cè)原理：
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 HCY 單抗包被于酶標(biāo)板上,，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 HCY與單抗結(jié)合,，加入生物素化的抗大鼠HCY，形成免疫復(fù)合物連接在板上,，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,，加入底物工作液顯藍(lán)色，zui后加終止液硫酸,，在450nm處測(cè)OD值,，HCY濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中HCY濃度,。
大鼠同型半胱氨（HCY）ELISA試劑盒操作流程：
- 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：標(biāo)準(zhǔn)品按照說(shuō)明書(shū)稀釋好五個(gè)梯度,，各個(gè)梯度每孔加樣量都為50μl，
- 加樣：分別設(shè)空白孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。
- 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
- 配液洗滌：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用；小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
- 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。
- 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
- 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)
- 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
11.計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為綜坐標(biāo),，OD值為橫坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。
注意事項(xiàng)：
1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵,。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高,。
3. 板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持板條干燥,。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存,。
5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷,！
