會(huì)員.png)
14
人類免疫缺陷病毒1型p24抗原ELISA試劑盒
【產(chǎn)品名稱】
通用名：人類免疫缺陷病毒1型p24抗原酶聯(lián)免疫試劑盒
英文名：ENZYME IMMUNOASSAY FOR DETECTION OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS TYPE I P24 ANTIGEN IN HUMAN SERUM, PLASMA AND CELL CULTURE SUPERNATANT
【包裝規(guī)格】
96人份/盒。
【預(yù)期用途】
本試劑盒用于人類免疫缺陷病毒1型p24抗原（Human Immunodeficiency Virus Type 1 p24 Antigen）的定量檢測(cè),，適用于人血清（或血漿）及細(xì)胞培養(yǎng)上清液等標(biāo)本,，僅供研究使用。
人類免疫缺陷病毒1型p24抗原ELISA試劑盒
【檢驗(yàn)原理】
本產(chǎn)品采用固相酶聯(lián)免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay,，ELISA）檢測(cè)人血清（或血漿）中的游離HIV-1 p24抗原和細(xì)胞培養(yǎng)上清液等標(biāo)本中的HIV-1 p24抗原,。本分析方法是基于雙抗體夾心的非競(jìng)爭(zhēng)性免疫分析。校準(zhǔn)品和樣品中HIV-1 p24抗原與固相抗- p24單克隆抗體和生物素標(biāo)記的抗-p24多克隆抗體通過免疫反應(yīng),，形成固相抗-p24單克隆抗體—p24抗原—抗-p24多克隆抗體-生物素復(fù)合物,；溫育后洗滌,，洗去非特異或多余的抗原和多余的生物素標(biāo)記的抗- p24多克隆抗體；然后加入HRP（Horseradish Peroxidase,，辣根過氧化物酶）標(biāo)記的鏈親和素,，形成固相抗- p24單克隆抗體—p24抗原—抗-p24多克隆抗體-生物素—鏈親和素-HRP復(fù)合物；溫育后洗滌,，洗去多余的HRP標(biāo)記的鏈親和素,。加入TMB-H2O2底物溶液，HRP催化H2O2氧化TMB生成藍(lán)色的產(chǎn)物（zui大吸收峰655nm）,，加入終止液終止酶催化反應(yīng),，生成黃色產(chǎn)物（zui大吸收峰450nm）。其吸光度與校準(zhǔn)品和樣品中的HIV-1 p24抗原濃度成正相關(guān),。通過劑量－反應(yīng)曲線可得出樣品中HIV-1 p24抗原濃度,。
試驗(yàn)類型 | 溫育時(shí)間 | 試驗(yàn)所需時(shí)間 | 試驗(yàn)溫度 | 試驗(yàn)所需樣本體積 |
免疫度量分析 | 120 分鐘 | 大約150分鐘 | 37°C 和室溫（18~30℃） | 75μL |
人類免疫缺陷病毒1型p24抗原ELISA試劑盒
【主要組成成份】
（Antibody Coated Microplate） | 1塊 | 包被有鼠抗-HIV-1 p24單克隆抗體的聚苯乙烯微孔板，約200ng/孔,。8孔×12條,。 鋁箔袋密封包裝，含干燥劑,。標(biāo)簽編號(hào)為R1。 |
（HIV-1 p24 Antigen Calibrator） | 1mL×1支 | 重組HIV-1 p24抗原溶液,，200IU/mL（約相當(dāng)于4,000pg/mL）,，稀釋液為校準(zhǔn)品稀釋液。用英國國家生物標(biāo)準(zhǔn)與檢定所(National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC)提供的WHO標(biāo)準(zhǔn)品（HIV-1 p24 Antigen 90/636）校準(zhǔn),。 綠色PP蓋子和無色PP塑料管,。標(biāo)簽編號(hào)為R2。 |
（Calibrator Diluent） | 20mL×1瓶 | 磷酸鹽緩沖液,，含動(dòng)物血清和鈣化的正常人血漿（經(jīng)ELISA檢測(cè),，HBsAg、抗-HCV和抗-HIV 1+2均為陰性）,，pH約7.3,。防腐劑為NaN3（不超過0.1%）和EDTA。 綠色PP蓋子和無色HPDE塑料瓶,。標(biāo)簽編號(hào)為R3,。 |
（Biotinylated Antibody） | 5mL×1瓶 | 生物素標(biāo)記的兔抗-HIV-1 p24多克隆抗體，約4µg/mL,。緩沖液為Tris-HCl,，含動(dòng)物血清、穩(wěn)定劑,、表面活性劑和綠色染料,，pH約7.4,。防腐劑為NaN3（不超過0.1%）。 藍(lán)色PP蓋子和無色HPDE塑料瓶,。標(biāo)簽編號(hào)為R4,。 |
（HRP Conjugated Streptavidin） | 20mL×1瓶 | HRP標(biāo)記鏈親和素，約0.1µg/mL（25mU/mL HRP）,。緩沖液為Tris-HCl,，含動(dòng)物血清、穩(wěn)定劑,、表面活性劑和紅色染料,，pH約7.4。防腐劑為ProClin®300（不超過1%）,。 紅色PP蓋子和棕色HPDE塑料瓶,。標(biāo)簽編號(hào)為R5。 |
（Concentrated Wash Buffer） | 50mL×1瓶 | 含表面活性劑的磷酸鹽緩沖液,，20倍濃縮,。防腐劑為ProClin®300（不超過1%）。 無色PP蓋子和無色HPDE塑料瓶,。標(biāo)簽編號(hào)為R6,。
|
（Substrate Buffer） | 10mL×1瓶 | 含H2O2的乙酸鹽緩沖液，pH約5.0,。 無色PP蓋子和無色HPDE塑料瓶,。標(biāo)簽編號(hào)為R7。 |
（Chromogen Solution） | 10mL×1瓶 | 含TMB的乙酸溶液,，pH約3.0,。 白色PP蓋子和棕色HPDE塑料瓶。標(biāo)簽編號(hào)為R8,。 |
（Stop Solution） | 10mL×1瓶 | 2mol/L H2SO4溶液,。 黃色PP蓋子和無色HPDE塑料瓶。標(biāo)簽編號(hào)為R9,。 |
（Plate Sealer） | 6張 | 用于溫育時(shí)微孔板的密封,。 |
（Instruction for Use） | 1份 | 本產(chǎn)品使用說明。 |
【儲(chǔ)存條件及有效期】
試劑盒置2~8℃保存,，有效期為12個(gè)月,。
【適用儀器】
酶標(biāo)儀、洗板機(jī),、恒溫培養(yǎng)箱等,。
【樣本要求】
- 樣本：人血清（或血漿）樣本，和細(xì)胞培養(yǎng)上清液等標(biāo)本,。
- 存放：樣本于2~8℃可儲(chǔ)存2天,；樣本長期儲(chǔ)存應(yīng)放置于-20℃或-20℃以下環(huán)境中,，且不宜反復(fù)凍融5次以上。
【檢驗(yàn)方法】
- 試劑配制方法
- HIV-1 p24校準(zhǔn)品系列的配制：
取6支離心管,，編號(hào)A,、B、C,、D,、E和F。管F中取900µL校準(zhǔn)品稀釋液,，加入100µL HIV-1 p24校準(zhǔn)品（200IU/mL,，4,000pg/mL），混勻,，作1:10稀釋,，配制成校準(zhǔn)品F（20IU/mL，400pg/mL）,；管E中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液,，加入500µL校準(zhǔn)品F，混勻,，作1:2稀釋,，配制成校準(zhǔn)品E（10IU/mL，200pg/mL） ,；管D中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液,，加入500µL校準(zhǔn)品E，混勻,，作1:2稀釋，配制成校準(zhǔn)品D（5IU/mL,，100pg/mL）,；管C中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入500µL校準(zhǔn)品D,，混勻,，作1:2稀釋，配制成校準(zhǔn)品C（2.5IU/mL,，50pg/mL）,；管B中取500µL校準(zhǔn)品稀釋液，加入500µL校準(zhǔn)品C,，混勻,，作1:2稀釋，配制成校準(zhǔn)品B（1.25IU/mL,，25pg/mL）,；以校準(zhǔn)品稀釋液作為校準(zhǔn)品A,。共配制成6個(gè)濃度的HIV-1 p24校準(zhǔn)品系列（A-F）：A 0、B 1.25IU/mL（25pg/mL）,、C 2.5IU/mL（50pg/mL）,、D 5IU/mL（100pg/mL）、E 10IU/mL（200pg/mL）和 F 20IU/mL（400pg/mL）,。配制好的HIV-1 p24校準(zhǔn)品系列應(yīng)保存在2~8°C,，于一月內(nèi)使用。
校準(zhǔn)品濃度 | 離心管編號(hào) | 校準(zhǔn)品稀釋液 | 加入 |
20IU/mL（400pg/mL） | F | 900µL | 100µL R2 |
10IU/mL（200pg/mL） | E | 500µL | 500µL 管 F |
5IU/mL（100pg/mL） | D | 500µL | 500µL 管E |
2.5IU/mL（50pg/mL） | C | 500µL | 500µL 管D |
1.25IU/mL（25pg/mL） | B | 500µL | 500µL 管C |
- 工作濃度洗滌液的配制：
用純水（蒸餾水或去離子水）將濃縮洗滌液稀釋20倍,，即為工作濃度洗滌液,。工作濃度洗滌液應(yīng)保存在2~8℃，于一月內(nèi)使用,。
- 標(biāo)準(zhǔn)操作方法
- 從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的微孔板條,，裝至微孔板架上。設(shè)空白對(duì)照1孔,，HIV-1 p24校準(zhǔn)品A,、B、C,、D,、E和F各2孔，其余各孔為待測(cè)樣品,，建議每個(gè)待測(cè)樣品均設(shè)置2孔,；編號(hào)標(biāo)記。向各孔內(nèi)分別加入25μL的生物素標(biāo)記抗體（空白對(duì)照孔不加）,，然后再向各孔內(nèi)分別加入75μL的HIV-1 p24校準(zhǔn)品或待測(cè)樣品,，輕輕振蕩微孔板，使內(nèi)容物充分混勻,。
- 用封板膜將微孔板密封,，置37℃溫育60分鐘。
- 棄去微孔板反應(yīng)孔內(nèi)液體,，每孔（含空白對(duì)照孔）加入350μL工作濃度洗滌液,，然后將洗滌液棄去。重復(fù)洗板共5次,，zui后拍干,。
- 每孔加 HRP標(biāo)記鏈親和素100μL（空白對(duì)照孔不加），用封板膜將微孔板密封,，置37℃溫育30分鐘,。
- 棄去微孔板反應(yīng)孔內(nèi)液體，每孔（含空白對(duì)照孔）加入350μL工作濃度洗滌液，然后將洗滌液棄去,。重復(fù)洗板共5次,，zui后拍干。
- 每孔加底物緩沖液和顯色劑各50μL（含空白對(duì)照孔）,，用封板膜將微孔板密封,，置室溫（18~30℃）避光溫育30分鐘。
- 每孔加終止液50μL（含空白對(duì)照孔）,，輕輕振蕩微孔板,，使內(nèi)容物充分混勻。
- 終止反應(yīng)后1小時(shí)內(nèi),，用酶標(biāo)儀在450nm波長處,，測(cè)定各孔吸光度值，參考波長選擇620-700nm,。
- 數(shù)據(jù)處理
- 求出HIV-1 p24抗原校準(zhǔn)品的吸光度平均值,。
- 以HIV-1 p24抗原校準(zhǔn)品的吸光度平均值為縱軸，以HIV-1 p24校準(zhǔn)品的濃度為橫軸,，在雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)圖上作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
- 如果待測(cè)樣品試驗(yàn)了2孔，求出待測(cè)樣品的吸光度平均值,。
- 將測(cè)得的樣品的吸光度值（或吸光度平均值）在上述標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出樣品中的HIV-1 p24抗原的濃度,。也可以通過軟件用zui小二乘法擬合曲線，求出樣品中的HIV-1 p24抗原的濃度,。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
- 質(zhì)量控制：空白對(duì)照校準(zhǔn)品吸光度值不高于0.050,，A點(diǎn)（0pg/mL）吸光度值不高于0.100，F點(diǎn)（400pg/mL）吸光度值不低于1.000,。
- 對(duì)于吸光度值超出校準(zhǔn)品F點(diǎn)的樣品,，可用校準(zhǔn)品稀釋液稀釋適宜倍數(shù)后再行測(cè)定，樣本中HIV-1 p24抗原濃度值為稀釋后測(cè)定值×稀釋倍數(shù),。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
- 本品僅適用于研究用途,，不用于臨床診斷。
- 本品僅適用于游離的HIV-1 p24抗原含量的檢測(cè),，不能用于總抗原含量的檢測(cè)。
- 樣本pH應(yīng)保證在5-10之間,，過低或過高的pH可能會(huì)造成HIV-1 p24抗原的測(cè)量值異常,。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
- 測(cè)定范圍：0~400pg/mL。
- 分析靈敏度：zui低檢測(cè)限不高于5pg/mL,。
- 校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線的線性：線性相關(guān)系數(shù)R>0.9900,。典型校準(zhǔn)曲線如下圖
- 精密性：批內(nèi)變異系數(shù)（Within-Run CV）不高于10%，批間變異系數(shù)（Between-Run CV）不高于15%,。
- 特異性：與HIV-1和HIV-2的env蛋白,、pol蛋白和gag蛋白中的p17（1型）等無交叉反應(yīng),。
- 膽紅素（Bilirubin，20mg/dL）,、血紅蛋白（Hemoglobin,，500mg/dL）和血脂（Triolein， 3,000mg/dL）對(duì)HIV-1 p24抗原的測(cè)量值無明顯干擾,。
- 抗凝劑（肝素0.2mg/mL,、檸檬酸鈉100mg/mL和EDTA 20mg/mL）對(duì)HIV-1 p24抗原的測(cè)量值無明顯干擾。
【注意事項(xiàng)】
- 本品僅適用于研究用途,。
- 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出,，應(yīng)平衡至室溫（18~30℃）后再使用。未用完的微孔條用自封袋密封保存,。
- 儲(chǔ)存和溫育時(shí)應(yīng)避光進(jìn)行,。
- 不得直接用手接觸終止液。若不慎接觸則應(yīng)立即用大量自來水沖洗,。
- 操作應(yīng)迅速,，加樣品時(shí)間過長、洗滌后放置太久均可能影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
- 每次測(cè)定均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
- 操作應(yīng)按說明書嚴(yán)格進(jìn)行。嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和時(shí)間,，并盡量使用移液器加樣,，結(jié)果判定以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
- 不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混用,，不要使用過期試劑,。
- 本品含有部分動(dòng)物源性物質(zhì)，操作必須符合國家有關(guān)傳染性疾病檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室管理及安全的規(guī)定,，并按有關(guān)實(shí)驗(yàn)室規(guī)程處理所使用組份及樣品,。
