人（Rock-1）ELISA試劑盒 人Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1試劑盒

產(chǎn)品名稱：人Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）ELISA試劑盒

英文名稱：Human Rho-associated protein kinase 1（ROCK1） ELISA kit

規(guī)格：48T/96T

適合種類：Human

預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定人血清,、血漿、細(xì)胞上清液,、尿液,、體液、灌洗液,、腦脊髓,、心房水、胸房水,、組織等其它相關(guān)液體中Rock-1的含量

保存溫度：4°C保存

有效期：6個(gè)月

反應(yīng)時(shí)間：1-5個(gè)小時(shí)

所需樣本量：50-100ul

檢測(cè)波長：450 nm

檢測(cè)范圍：0.5 ng/ml -30 ng/ml

人（Rock-1）ELISA試劑盒 人Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1試劑盒

本試劑僅供研究使用

目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）的含量。

實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）水平,。用純化的人Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）,，再與HRP標(biāo)記的Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rock-1）濃度。

試劑盒組成：

試劑盒組成  48孔配置 96孔配置 保存

說明書 1份 1份

封板膜 2片（48）     2片（96）    

密封袋 1個(gè) 1個(gè)

酶標(biāo)包被板  1×48    1×96    2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品：45ng/ml  0.5ml×1瓶    0.5ml×1瓶    2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液     1.5ml×1瓶    1.5ml×1瓶    2-8℃保存

酶標(biāo)試劑    3 ml×1瓶     6 ml×1瓶     2-8℃保存

樣品稀釋液  3 ml×1瓶     6 ml×1瓶     2-8℃保存

顯色劑A液  3 ml×1瓶     6 ml×1瓶     2-8℃保存

顯色劑B液  3 ml×1瓶     6 ml×1瓶     2-8℃保存

終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

濃縮洗滌液  （20ml×20倍）×1瓶   （20ml×30倍）×1瓶   2-8℃保存

操作步驟：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,，在*,、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻；然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為30 ng/ml,，20 ng/ml ，10 ng/ml,，5 ng/ml,， 2.5ng/ml）。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

注意事項(xiàng)：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn),。

計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。