產(chǎn)品名稱：人Ras相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1（Rac1）ELISA試劑盒

英文名稱：Human Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1（RAC1） ELISA kit

別名：人Ras相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1（Rac1）ELISA檢測(cè)試劑盒；人Ras相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1（Rac1）ELISA酶免試劑盒,；人Ras相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1（Rac1）ELISA Kit,；MGC111543, MIG5, TC-25, p21-Rac1, migration-inducing gene 5|ras-related C3 botulinum toxin substrate 1|rho family, small GTP binding protein Rac1

種屬：人 Human

檢測(cè)范圍：10pg/ml  -600pg/ml

靈敏度：

反應(yīng)時(shí)間：

需要樣本：50-100ul

檢測(cè)波長(zhǎng)：450 nm

預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿,、細(xì)胞上清液,、尿液、體液,、灌洗液,、腦脊髓、心房水,、胸房水,、組織等其它相關(guān)液體中Rac1含量

方法：酶免ELISA　雙抗夾心法　兩步法

優(yōu)點(diǎn)：重復(fù)性好　穩(wěn)定　精準(zhǔn)

有效期：6個(gè)月

保存溫度：4°C

原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人Ras相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1（Rac1）水平。用純化的人Ras相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1（Rac1）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入Ras相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1（Rac1），再與HRP標(biāo)記的Ras相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1（Rac1）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的Ras相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1（Rac1）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人Ras相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1（Rac1）濃度,。

操作步驟：

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為600pg/ml， 400pg/ml,，200pg/ml,，100pg/ml， 50pg/ml）,。

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.  配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。

5.  洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。

6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。

7.  溫育：操作同3,。

8.  洗滌：操作同5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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