人P53蛋白（P53）Elisa試劑盒試劑盒

【用途】

定量檢測(cè)人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中P53蛋白（P53）的含量,。

【檢測(cè)原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品,、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被人P53蛋白（P53）單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分,，再加入酶標(biāo)工作液,，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A,、B，底物（TMB）在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中人P53蛋白（P53）濃度呈正相關(guān)，450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,，計(jì)算樣本中人P53蛋白（P53）含量。

【試劑盒組成】

備注：標(biāo)準(zhǔn)品（1號(hào)→6號(hào)）濃度依次為：40,、20,、10、5,、2.5,、1.25 pg/mL

【需要而未提供的試劑和器材】

1、37℃恒溫箱

2,、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3,、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5、一次性試管

6,、吸水紙

【操作步驟】

1,、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。

2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3,、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對(duì)照孔不加,。

4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板）,。

6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,，空白對(duì)照孔不加,。

7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

8,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板）。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）,，37℃避光顯色15min,。

10、終止：取出酶標(biāo)板,，每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11,、測(cè)定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD值）,。

12,、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算,。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃）,，因?yàn)榀B氮鈉（NaN₃）是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的抑制劑,。

2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3,、樣本應(yīng)充分離心,，不得有溶血及顆粒。

【注意事項(xiàng)】

1,、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2,、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。

3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè),，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差,。

4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度,。

5,、本試劑盒定量范圍為1.25-40pg/mL，超過(guò)此范圍,，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果（1.25-40pg/mL范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。

6、若顯色過(guò)淺,，可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間,。

7、為避免交叉污染,，標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜,。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號(hào)的試劑不得混用,。

9、底物B對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。

【操作程序總結(jié)】

 1.準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

2.加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,，37℃反應(yīng)30分鐘

3.洗板4次,，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘

4.洗板4次,，加入顯色液A,、B，37℃顯色15分鐘

5.加入終止液

6.15分鐘之內(nèi)讀OD值

7.計(jì)算

 【檢測(cè)范圍】

1.25pg/mL - 40pg/mL

【規(guī)格】

96人份/盒

【貯藏】

2-8℃,，避光防潮保存,。

【有效期】

6個(gè)月