MDCC-MSB-1細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

產(chǎn)品名稱：MDCC-MSB-1細(xì)胞

中文名稱：人包皮成纖維細(xì)胞

種屬：人

來源：包皮,；成纖維細(xì)胞；男性

培養(yǎng)條件：DMEM

生長狀態(tài)：貼壁

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MDCC-MSB-1細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇

為了防止因污染或技術(shù)原因使長期培養(yǎng)功虧一簣,，考慮到培養(yǎng)細(xì)胞因傳代而遲早會出現(xiàn)變異，有時因寄贈,、交換和購買,，培養(yǎng)細(xì)胞從一個實(shí)驗室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個實(shí)驗室，*的策略是進(jìn)行低溫保存。這對于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要?，F(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(－70℃~－196℃)的特點(diǎn)。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是：在－70℃以下時,，細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止,，即代謝處于*停止?fàn)顟B(tài)，故可以長期保存,。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵,，在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi),，水晶呈針狀,，極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。

一,、細(xì)胞的凍存：為避免污染造成的損失,，zui小化連續(xù)細(xì)胞系的遺傳改變和避免有限細(xì)胞系的老化和轉(zhuǎn)化，需要凍存哺乳細(xì)胞,。凍存細(xì)胞前,，細(xì)胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。

有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細(xì)胞,。對于包含有血清的培養(yǎng)基,，成分可能如下：

包含10％甘油的*培養(yǎng)基，

包含10％二甲基亞砜（DMSO）的*培養(yǎng)基,，

50％ 細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50％含有10％甘油的新鮮培養(yǎng)基,，或

50％ 細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50％含有10％二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。

對于無血清培養(yǎng)基,，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：

50％ 細(xì)胞條件無血清培養(yǎng)基和50％包含有7.5％二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基,，或

包含有7.5％二甲基亞砜和10％細(xì)胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。MDCC-MSB-1細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

SW1990   人胰腺癌細(xì)胞         人     胰腺癌,；男性         L15   貼壁

RPMI8226        人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞     人     骨髓瘤,；男性         1640         懸浮

HMrSV5   人腹膜間皮細(xì)胞     人     腹膜間皮細(xì)胞         1640         貼壁

MEG-01   人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞     人     慢性髓細(xì)胞性白血病,；男性         1640         懸浮

CCD-18Co         正常人結(jié)腸成纖維細(xì)胞         人     結(jié)腸,；成纖維細(xì)胞；女性     EMEM      貼壁

KGN 人卵巢顆粒細(xì)胞     人     卵巢,；顆粒細(xì)胞,；女性         DMEM     貼壁

HCC70      人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞         人     乳腺導(dǎo)管癌；女性         DMEM     貼壁

C3A  人肝母細(xì)胞癌細(xì)胞         人     肝母細(xì)胞癌,；男性         IMDM      貼壁

QBC939   人膽管癌細(xì)胞         人     膽管癌     1640         貼壁

Leydig       豬睪丸間質(zhì)細(xì)胞     豬     睪丸,；間質(zhì)細(xì)胞     DMEM     貼壁

BPH-1       人前列腺增生細(xì)胞         人     良性前列腺增生；男性         1640         貼壁

WML2      小鼠肺成纖維細(xì)胞         小鼠         肺；成纖維細(xì)胞     DMEM     貼壁

Hs578Bst          人正常乳腺細(xì)胞     人     乳腺細(xì)胞         1640         貼壁

HCASMC  人冠狀動脈平滑肌細(xì)胞         人     冠狀動脈平滑肌     DMEM     貼壁

HSC-3       人口腔鱗癌細(xì)胞     人     舌鱗癌,；男性         EMEM      貼壁

CA9-22     人口腔上皮癌細(xì)胞         人     牙齦鱗癌,；男性     DMEM     貼壁

MHCC97H        人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞     人     肝癌；高轉(zhuǎn)移,；男性     EMEM      貼壁

SSP-25      人肝膽管癌細(xì)胞     人     肝內(nèi)膽管癌,；女性         DMEM     貼壁

JeKo-1      人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞     人     套細(xì)胞淋巴瘤；女性     1640         懸浮

MCF-10A 人正常乳腺上皮細(xì)胞     人     乳腺,；上皮細(xì)胞,；自發(fā)永生；男性     1640         貼壁

BeWo        人胎盤絨毛癌細(xì)胞         人     妊娠性絨癌     EMEM      貼壁

MOVAS     小鼠主動脈平滑肌細(xì)胞         小鼠         主動脈平滑??；SV40轉(zhuǎn)化；C57BL/6  DMEM     貼壁

MA-104    猴胎腎細(xì)胞     猴     胚腎,；自發(fā)永生     DMEM     貼壁

LAD2         人肥大細(xì)胞     人     肥大細(xì)胞         1640         懸浮

HMC-1     人肥大細(xì)胞     人     肥大細(xì)胞         IMDM      懸浮

NCI-H1299       人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞     人     大細(xì)胞肺癌,；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；男性         1640         貼壁

IPEC-J2     豬小腸上皮細(xì)胞     豬     小腸,；上皮細(xì)胞,；自發(fā)永生         1640         貼壁

MARC-145        猴胚胎腎上皮細(xì)胞         猴     胚腎；自發(fā)永生     DMEM     貼壁

凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:凍存細(xì)胞較脆弱,，要輕柔操作,。凍存細(xì)胞要快速融化，并直接加入*生長培養(yǎng)基中,。若細(xì)胞對凍存劑（DMSO或甘油）敏感,，離心去除凍存培養(yǎng)基，然后加入*生長培養(yǎng)基中,。

1,、直接鋪板方法

取出貯存細(xì)胞，37℃水浴中快速融化,。

直接用*生長培養(yǎng)基鋪板細(xì)胞,。1ml凍存細(xì)胞使用10~20ml*生長培養(yǎng)基。進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù),，細(xì)胞接種應(yīng)該至少在3×10⁵活細(xì)胞/ml,。培養(yǎng)細(xì)胞12到24小時，更換新鮮的*生長培養(yǎng)基,，去除凍存劑,。

2、離心方法

取出貯存細(xì)胞,，37℃水浴中快速融化,。

把1到2ml凍存細(xì)胞加入到大約25ml*生長培養(yǎng)基，輕輕混勻。

以大約80x g離心2到3分鐘,。

棄去上清,。

在*生長培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細(xì)胞，并且進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù),。

細(xì)胞鋪板,，細(xì)胞接種應(yīng)該至少為3×105活細(xì)胞/ml。

三,、細(xì)胞的分化、衰老與死亡

1,、細(xì)胞的分化:一個成年人全身細(xì)胞總數(shù)約1012個,，可以區(qū)分為200多種不同類型的細(xì)胞：形態(tài)結(jié)構(gòu)，代謝,，行為,，功能等各不相同。追根溯源,，這么多種細(xì)胞均來自一個受精卵細(xì)胞,。所以，通常把發(fā)育過程中,，細(xì)胞后代在形態(tài),、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程稱為細(xì)胞分化。細(xì)胞分化發(fā)生在胚胎階段,，也發(fā)生在胎兒出生以后,，乃至成人階段。例如,，人體血細(xì)胞的產(chǎn)生和分化,，這個過程在人的一生中一直持續(xù)著。

由旺盛生長不斷分裂的細(xì)胞,，轉(zhuǎn)入分化,，通常從細(xì)胞周期中G1期開始時一個確定的點(diǎn)G0點(diǎn)“逃逸”出細(xì)胞周期。旺盛生長分裂的細(xì)胞和各種分化了的細(xì)胞,，它們的基因表達(dá)和代謝活動各不相同,。

2、細(xì)胞的衰老:體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗證明：

成纖維細(xì)胞：來自胎兒傳代50次后衰老死亡,來自成人傳代20次后衰老死亡(與具體年齡有關(guān));來自小鼠傳代14--28次后衰老死亡,來自烏龜傳代90--125次后衰老死亡,。

細(xì)胞衰老過程中會發(fā)生一系列的變化,，包括：蛋白質(zhì)合成速度降低，已有蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化,，特異蛋白質(zhì)成份出現(xiàn),；同時，細(xì)胞核，線粒體,，膜系統(tǒng),、骨架系統(tǒng)等都有結(jié)構(gòu)、功能的改變,。

細(xì)胞衰老原因,，尚無定論，出現(xiàn)過好幾種理論與假說,，其中得到較廣泛認(rèn)可的是“自由基損傷假說”,。

3、細(xì)胞凋亡:細(xì)胞的死亡是個體存活的正?，F(xiàn)象,，常見的細(xì)胞死亡形式有3種：壞死、凋亡和細(xì)胞毒性,。多細(xì)胞生物的生命活動中,，因為環(huán)境因素的突然變化或病原物的入侵，導(dǎo)致一部分細(xì)胞死,，稱為細(xì)胞的病理死亡,，或細(xì)胞壞死。壞死是細(xì)胞暴露于嚴(yán)重的物理或化學(xué)刺激時導(dǎo)致的細(xì)胞死亡,；細(xì)胞毒性是由細(xì)胞或者化學(xué)物質(zhì)引起的單純的細(xì)胞殺傷事件,，不依賴于其它兩種細(xì)胞死亡機(jī)理，如殺傷T細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用,。

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