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ES-2細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

時(shí)間:2017-2-24閱讀:1192

ES-2細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

產(chǎn)品名稱(chēng):ES-2細(xì)胞

中文名稱(chēng):人卵巢透明細(xì)胞癌

種屬:人

來(lái)源:卵巢透明細(xì)胞癌;女性

培養(yǎng)條件:1640

生長(zhǎng)狀態(tài):貼壁

2017年新學(xué)期,,迎著朝陽(yáng),,放飛夢(mèng)想,久別重逢,,相聚一堂,,百尺竿頭,更進(jìn)一步,,學(xué)無(wú)止境,,自立自強(qiáng),為國(guó)爭(zhēng)光,,慧穎細(xì)胞庫(kù)為答謝各位莘莘學(xué)子的厚愛(ài),,在新學(xué)期開(kāi)學(xué)之際,將慧穎細(xì)胞庫(kù)1223株細(xì)胞特惠出售,,更多活動(dòng)詳情,,請(qǐng)致電市場(chǎng)部!

 

ES-2細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

有的客戶(hù)在COS-1細(xì)胞復(fù)蘇傳代后發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞狀態(tài)不好,,形態(tài)不佳,,透光度亦不好,如果老師認(rèn)為復(fù)蘇過(guò)程沒(méi)問(wèn)題,,那就核實(shí)下是否是從液氮拿出直接放入溫水,,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,,培養(yǎng)基,、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,,看看能否幫助貼壁,,當(dāng)然也需要考慮血清問(wèn)題,,還有確信拿來(lái)的細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題。

有的老師認(rèn)為首先應(yīng)該懷疑凍存,,實(shí)際上復(fù)蘇出問(wèn)題的可能非常小,,因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單,而且死板,。

1,、確認(rèn)下凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),這是一般人所注意不到的,,即使書(shū)上也不講這個(gè)問(wèn)題,,但我們因?yàn)檫@個(gè)問(wèn)題就兩種肺癌細(xì)胞和一種肝癌細(xì)胞專(zhuān)門(mén)做過(guò)試驗(yàn),這個(gè)是絕大部分人細(xì)胞復(fù)不活的一個(gè)原因,。太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。

 

2,、老師的凍存液好不好,,是什么,甘油還是DMSO,,質(zhì)量非常重要,,否則也會(huì)死亡。

 

3,、老師的凍存液的量加的是不是太多,,ATCC推薦是不超過(guò)7%,大于5%,,太多也不好,。

 

4、老師在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,,這個(gè)有一些影響,,但不算太大。

 

5,、老師的凍存是否按部就班,,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng),。

 

6、如果老師的細(xì)胞污染,,你是否能很快看到,。從這個(gè)角度講建議去除離心這步,。

 

7、老師的細(xì)胞在凍存前是否過(guò)密,。

 

還有,,我們是不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話(huà),,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o(wú)論你如何處理都有大量的細(xì)菌,,問(wèn)題在操作,。我們的細(xì)胞房不換拖鞋,非常臟,,別人的細(xì)胞都污染,,很多細(xì)胞都污染到絕種,但我們的只污染一次(兩年內(nèi)只有兩瓶),,那次是因?yàn)楫?dāng)初有某高校組織學(xué)生參觀我們細(xì)胞庫(kù)給動(dòng)過(guò)了,,我們每次細(xì)胞擺放順序都是記住的。如果老師老懷疑孵箱污染,,我們會(huì)認(rèn)為老師的復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)還需要進(jìn)一步熟練和積累經(jīng)驗(yàn),。

每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問(wèn)題,,這個(gè)很重要,,不能靠猜。

ES-2細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

293AD   人胚腎細(xì)胞  人  胚腎,;5型腺病毒轉(zhuǎn)化,;女性   DMEM    貼壁   

T241    小鼠纖維肉瘤細(xì)胞    小鼠    纖維肉瘤    DMEM    貼壁   

RGM1    大鼠正常胃黏膜上皮細(xì)胞  大鼠    胃黏膜;上皮細(xì)胞,;自發(fā)永生,;Wistar  1640    貼壁   

BT  新生牛鼻甲細(xì)胞  牛  鼻甲;自發(fā)永生,;Holstein    EMEM    貼壁   

USMC    大鼠血管平滑肌細(xì)胞  大鼠    血管平滑肌  DMEM    貼壁   

SBC-5   人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞    人  小細(xì)胞肺癌,;胸腔積液轉(zhuǎn)移;男性  1640    貼壁   

D407    人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞    人  視網(wǎng)膜,;色素上皮細(xì)胞,;自發(fā)永生;男性    DMEM    貼壁   

ETCC-007    人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞    人  浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌,;女性  DMEM    貼壁   

HLF-a  人肺鱗癌細(xì)胞    人  肺鱗癌,;女性    1640    貼壁   

LK2 人肺鱗癌細(xì)胞    人  肺鱗癌;男性    1640    貼壁   

ESC 人表皮干細(xì)胞    人  表皮干細(xì)胞  DMEM    貼壁   

MASMC   小鼠氣道平滑肌細(xì)胞  小鼠    氣道平滑肌  DMEM    貼壁   

M109    小鼠肺癌細(xì)胞    小鼠    肺癌    DMEM    貼壁   

SK-GT-2 人胃癌細(xì)胞  人  胃底癌,;男性    1640    貼壁   

MOLM-14 人急性髓系白血病細(xì)胞    人  急性髓系白血??;男性    IMDM    懸浮   

Kelly   人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞  人  神經(jīng)母細(xì)胞瘤;女性  DMEM    貼壁   

NCI-H441    人肺腺癌細(xì)胞    人  乳頭狀肺腺癌,;男性  1640    貼壁   

COLO-16 人皮膚鱗癌細(xì)胞  人  皮膚鱗癌,;女性  DMEM    貼壁   

HEL299  人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞    人  紅白細(xì)胞白血病  1640    懸浮   

SK-UT-1 人子宮平滑肌瘤細(xì)胞  人  子宮平滑肌瘤;女性  EMEM    貼壁   

NB1-RGB 人皮膚成纖維細(xì)胞    人  皮膚,;成纖維細(xì)胞,;男性  DMEM    貼壁   

S91 小鼠黑色素瘤細(xì)胞    小鼠    黑色素瘤;雄性,;DBA 1640    貼壁       

NCI-H2170   人肺鱗癌細(xì)胞    人  肺鱗癌,;男性    1640    貼壁       

RPMI2650    人鼻腔上皮細(xì)胞  人  頭頸鱗癌;胸腔積液轉(zhuǎn)移,;男性    DMEM    貼壁       

NCI-H2073   人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞  人  肺腺癌,;男性    1640    貼壁       

HSC-5   人皮膚鱗癌細(xì)胞  人  皮膚鱗癌;男性  DMEM    貼壁       

KYSE520 人食管鱗癌細(xì)胞  人  食管鱗癌,;女性  DMEM    貼壁       

OCM-1   人眼脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞  人  葡萄膜黑色素瘤,;女性    DMEM    貼壁       

VE  人血管內(nèi)皮細(xì)胞  人  血管;內(nèi)皮細(xì)胞  DMEM    貼壁       

NT2/D1  人畸胎瘤細(xì)胞    人  畸胎瘤,;肺轉(zhuǎn)移;男性    DMEM    貼壁       

YTMLC-90    人肺鱗癌細(xì)胞    人  肺鱗癌,;男性    1640    貼壁       

8305C   人甲狀腺癌細(xì)胞  人  甲狀腺癌,;女性  DMEM    貼壁       

L132    人胚胎肺上皮細(xì)胞    人  胚肺;女性  DMEM    貼壁       

3T3-F442A   小鼠脂肪前體細(xì)胞    小鼠    脂肪前體細(xì)胞,;雄性,;Swiss albino    DMEM    貼壁       

SHI-1   人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞    人  急性單核細(xì)胞白血病,;男性    1640    懸浮       

HLE 人肝癌細(xì)胞  人  肝癌,;男性  1640    貼壁       

OS-732  人骨肉瘤細(xì)胞    人  骨肉瘤  McCOY's   貼壁       

NCI-H526    人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞    人  小細(xì)胞肺癌;骨髓轉(zhuǎn)移,;男性  1640    貼壁   

ReNcell CX  人神經(jīng)干細(xì)胞    人  神經(jīng)干細(xì)胞  DMEM    貼壁   

IHH-4   人甲狀腺癌細(xì)胞  人  甲狀腺乳頭狀癌,;男性    DMEM    貼壁   

VK2/E6E7    人陰道上皮細(xì)胞  人  陰道;上皮細(xì)胞,;HPV16轉(zhuǎn)化,;女性 DMEM    貼壁   

N1E-115 小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞    小鼠    神經(jīng)母細(xì)胞瘤;雄性,;A/J EMEM    貼壁   

HMEL    永生上皮細(xì)胞    人  上皮細(xì)胞,;永生化    1640    貼壁   

LN229   人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞  人  膠質(zhì)母細(xì)胞瘤;女性  DMEM    貼壁   

PANC05.04   人胰腺癌細(xì)胞    人  胰腺管癌,;女性  DMEM    貼壁   

HRVEC   人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞  人  視網(wǎng)膜微血管,;內(nèi)皮細(xì)胞  DMEM    貼壁   

rUCMSCs 大鼠臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞    大鼠    臍帶,;間充質(zhì)干細(xì)胞  DMEM    貼壁   

rRTEC   大鼠腎小管上皮細(xì)胞  大鼠    腎小管;上皮細(xì)胞    DMEM    貼壁   

HCC1569 人乳腺癌細(xì)胞    人  乳腺管癌,;女性  DMEM    貼壁   

Mel-RM  人黑色素瘤細(xì)胞  人  黑色素瘤,;神經(jīng)節(jié)轉(zhuǎn)移;男性  DMEM    貼壁   

WM-266-4    人黑色素瘤細(xì)胞  人  黑色素瘤,;皮膚轉(zhuǎn)移,;女性    DMEM    貼壁   

UT-7    人急性成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞  人  急性成巨核細(xì)胞白血病,;男性  1640    懸浮   

KPL1    人乳腺癌細(xì)胞    人  浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌,;女性  EMEM    貼壁   

PLA-802 人惡性橫紋肌肉瘤細(xì)胞    人  肺泡橫紋肌肉瘤;男性    DMEM    貼壁   

CEF 雞胚成纖維細(xì)胞  雞  胚胎,;成纖維細(xì)胞    DMEM/F12    貼壁   

143B    人骨肉瘤細(xì)胞    人  骨肉瘤,;男性    McCoy’s 貼壁   

CT26.CL25   小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞  小鼠    結(jié)腸癌; BALB/c 1640    貼壁   

C166    小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞    小鼠    血管內(nèi)皮    DMEM    貼壁   

A375SM  人惡性黑色素瘤細(xì)胞  人  黑色素瘤,;女性  DMEM    貼壁   

HKBML   人原發(fā)中樞淋巴瘤細(xì)胞    人  腦,;淋巴瘤;男性    1640    懸浮   

為了應(yīng)付季節(jié)變化CV-1細(xì)胞運(yùn)輸,、培養(yǎng)帶來(lái)的真菌等污染問(wèn)題,,公司特做以下建議:

1)細(xì)胞的運(yùn)輸、轉(zhuǎn)移過(guò)程中,,請(qǐng)勿打開(kāi)自封袋,;拿放細(xì)胞時(shí)請(qǐng)持瓶體,切勿在非無(wú)菌環(huán)球中碰觸,、擰動(dòng)瓶口封口膜位置

2)進(jìn)入生物安全柜前,,打開(kāi)自封袋拿出培養(yǎng)瓶,噴上酒精放進(jìn)操作臺(tái)(不建議使用酒精棉球擦拭),,撕開(kāi)封口膜后,,用酒精燈外焰對(duì)瓶口燒灼一圈(3秒左右)

3)豎立培養(yǎng)瓶,擰開(kāi)瓶蓋(如是貼壁細(xì)胞,,請(qǐng)用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基,,切勿讓瓶口處的液體回流進(jìn)瓶?jī)?nèi))

4)更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基,嚴(yán)格按照無(wú)菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)

ES-2細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

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