COLO 320DM 細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

產(chǎn)品名稱：COLO 320DM 細(xì)胞

中文名稱：人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

種屬：人

2017年新學(xué)期,，迎著朝陽,，放飛夢(mèng)想，久別重逢,，相聚一堂,，百尺竿頭，更進(jìn)一步,，學(xué)無止境,，自立自強(qiáng)，為國(guó)爭(zhēng)光,，慧穎細(xì)胞庫為答謝各位莘莘學(xué)子的厚愛,，在新學(xué)期開學(xué)之際，將慧穎細(xì)胞庫1223株細(xì)胞特惠出售,，更多活動(dòng)詳情,，請(qǐng)致電市場(chǎng)部！

COLO 320DM 細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

有的客戶在COS-1細(xì)胞復(fù)蘇傳代后發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞狀態(tài)不好,，形態(tài)不佳,，透光度亦不好，如果老師認(rèn)為復(fù)蘇過程沒問題,，那就核實(shí)下是否是從液氮拿出直接放入溫水,，還有培養(yǎng)箱，二氧化碳濃度,，培養(yǎng)基,、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,，看看能否幫助貼壁,，當(dāng)然也需要考慮血清問題,，還有確信拿來的細(xì)胞沒問題。

有的老師認(rèn)為首先應(yīng)該懷疑凍存,，實(shí)際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,，因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單，而且死板,。

1,、確認(rèn)下凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過長(zhǎng)，這是一般人所注意不到的,，即使書上也不講這個(gè)問題,，但我們因?yàn)檫@個(gè)問題就兩種肺癌細(xì)胞和一種肝癌細(xì)胞專門做過試驗(yàn)，這個(gè)是絕大部分人細(xì)胞復(fù)不活的一個(gè)原因,。太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,，表現(xiàn)為先貼后死，原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,，不可逆轉(zhuǎn)的死亡,。

2、老師的凍存液好不好,，是什么,，甘油還是DMSO，質(zhì)量非常重要,，否則也會(huì)死亡,。

3、老師的凍存液的量加的是不是太多,，ATCC推薦是不超過7%,，大于5%，太多也不好,。

4,、老師在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻，這個(gè)有一些影響,，但不算太大,。

5、老師的凍存是否按部就班,，就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,，很多人容易忘卻這個(gè)事情，因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng),。

6,、如果老師的細(xì)胞污染，你是否能很快看到。從這個(gè)角度講建議去除離心這步,。

7,、老師的細(xì)胞在凍存前是否過密。

還有,，我們是不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,，所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話，這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,，但這不代表孵箱污染，因?yàn)榉跸錈o論你如何處理都有大量的細(xì)菌,，問題在操作,。我們的細(xì)胞房不換拖鞋，非常臟,，別人的細(xì)胞都污染,，很多細(xì)胞都污染到絕種，但我們的只污染一次（兩年內(nèi)只有兩瓶）,，那次是因?yàn)楫?dāng)初有某高校組織學(xué)生參觀我們細(xì)胞庫給動(dòng)過了,，我們每次細(xì)胞擺放順序都是記住的。如果老師老懷疑孵箱污染,，我們會(huì)認(rèn)為老師的復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)還需要進(jìn)一步熟練和積累經(jīng)驗(yàn),。

每次污染的原因都要盡可能的找，以后就不犯同樣的問題,，這個(gè)很重要,，不能靠猜。

COLO 320DM 細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

MN60    人B細(xì)胞白血病細(xì)胞  人  B細(xì)胞白血??；男性   1640    懸浮       

COLO-1  人角質(zhì)形成層細(xì)胞    人  角質(zhì)形成層  DMEM    貼壁       

Hut-102 人皮膚T淋巴瘤細(xì)胞  人  皮膚；T淋巴瘤   1640    懸浮       

HPMC    人腹膜間皮細(xì)胞  人  腹膜間皮細(xì)胞    1640    貼壁       

SK-N-FI     人腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞    人  神經(jīng)母細(xì)胞瘤,；男性  DMEM    貼壁       

OCI-LY1 人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞    人  彌漫大B淋巴瘤,；男性    IMDM    懸浮       

hRPE    人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞    人  視網(wǎng)膜；色素上皮細(xì)胞    1640    貼壁       

SG231   人膽管上皮癌細(xì)胞    人  肝內(nèi)膽管癌,；男性    1640    貼壁   

CCLP1   人膽管癌細(xì)胞    人  肝內(nèi)膽管癌,；女性    DMEM    貼壁   

hESC    人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞  人  子宮內(nèi)膜；間質(zhì)細(xì)胞,；女性    EMEM    貼壁   

BAr-T   人食管上皮細(xì)胞  人  食管,；HGNC-TERT轉(zhuǎn)化；男性   DMEM    貼壁   

HIBEC   人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞 人  肝內(nèi)膽管,；上皮細(xì)胞 1640    貼壁   

KYSE180 人食管鱗癌細(xì)胞  人  食管鱗癌,；男性  1640    貼壁   

melan-a 小鼠黑色素細(xì)胞  小鼠    黑色素細(xì)胞；自發(fā)永生；C57BL/6   1640    貼壁   

RBSMC   大鼠腦動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞    大鼠    腦動(dòng)脈,；平滑肌  DMEM    貼壁   

 H4IIEC3    大鼠肝癌細(xì)胞    大鼠    肝癌,；雄性；AxC DMEM    貼壁   

LIPF155C    人膽管癌細(xì)胞    人  膽管癌  DMEM/1640   貼壁   

LIPF178C    人膽管癌細(xì)胞    人  膽管癌  DMEM/1640   貼壁   

SW1783  人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞  人  間變性星形細(xì)胞瘤,；男性  DMEM    貼壁   

LICCF   人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞    人  肝內(nèi)膽管癌  1640    貼壁   

QGY7703 人肝癌細(xì)胞  人  肝癌,；女性  1640    貼壁   

HCCLM6  人肝癌細(xì)胞  人  肝癌    1640    貼壁   

ST2 小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞    小鼠    基質(zhì)；BALB/c    DMDM    貼壁   

K7M2-WT 小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞  小鼠    骨肉瘤,；肺轉(zhuǎn)移,；雌性；BALB/c    EMEM    貼壁   

WB-F344 大鼠肝上皮樣干細(xì)胞  大鼠    肝,；自發(fā)永生,；Fischer 344   DMEM    貼壁   

Hs683   人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞  人  少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤；男性    DMEM    貼壁   

SV40-MES-13 小鼠腎小球系膜細(xì)胞  小鼠    腎小球系膜,；SV40轉(zhuǎn)化    DMEM    貼壁   

C8166   人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞  人  T淋巴細(xì)胞白血?。籋TLV-1轉(zhuǎn)化    1640    懸浮   

HSAEC1-KT   人肺小氣道上皮細(xì)胞  人  肺,；HGNC-TERT轉(zhuǎn)化,；男性 DMEM    貼壁   

L-540   人霍奇金淋巴瘤細(xì)胞  人  霍奇金淋巴瘤；女性  1640    懸浮   

rRMECs  大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞    大鼠    視網(wǎng)膜微血管,；內(nèi)皮細(xì)胞  DMEM    貼壁   

GC9811-P    人胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞    人  胃癌    1640    貼壁   

HepG2.2.15  穩(wěn)轉(zhuǎn)HBV病毒HepG2細(xì)胞  人  肝癌,；穩(wěn)轉(zhuǎn)HBV病毒  IMDM    貼壁   

BSC40   非洲綠猴腎細(xì)胞  非洲綠猴    腎；自發(fā)永生    DMEM    貼壁   

SNU-5   人胃癌細(xì)胞  人  胃癌,；女性  1640    懸浮   

RASMCs  大鼠氣道平滑肌細(xì)胞  大鼠    氣道平滑肌  DMEM    貼壁   

OSK-1   小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)   小鼠    誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞    DMEM    貼壁   

B35 大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞    大鼠    神經(jīng)母細(xì)胞瘤,；BDIX  DMEM    貼壁   

HCE-2 [50.B1]   人角膜上皮細(xì)胞  人  角膜上皮；Ad12-SV40,；男性   1640    貼壁    為了應(yīng)付季節(jié)變化CV-1細(xì)胞運(yùn)輸,、培養(yǎng)帶來的真菌等污染問題，公司特做以下建議：

1）細(xì)胞的運(yùn)輸,、轉(zhuǎn)移過程中,，請(qǐng)勿打開自封袋；拿放細(xì)胞時(shí)請(qǐng)持瓶體,，切勿在非無菌環(huán)球中碰觸,、擰動(dòng)瓶口封口膜位置

2）進(jìn)入生物安全柜前，打開自封袋拿出培養(yǎng)瓶,，噴上酒精放進(jìn)操作臺(tái)（不建議使用酒精棉球擦拭）,，撕開封口膜后，用酒精燈外焰對(duì)瓶口燒灼一圈（3秒左右）

3）豎立培養(yǎng)瓶,，擰開瓶蓋（如是貼壁細(xì)胞,，請(qǐng)用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基，切勿讓瓶口處的液體回流進(jìn)瓶?jī)?nèi)）

4）更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)

COLO 320DM 細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析