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Exosome是一種可由多種細(xì)胞分泌的直徑為30-150nm的膜性小囊泡,。經(jīng)研究后發(fā)現(xiàn),exosome其內(nèi)含有*的蛋白質(zhì)與核酸分子,,exosome所含成份與其細(xì)胞來源密切相關(guān),,這也決定了exosome的功能特異性,如抗原提呈,、信號傳導(dǎo)或誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng),、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化,、細(xì)胞間通信,、腫瘤轉(zhuǎn)移等。目前,,exosome研究已經(jīng)成為臨床診斷與基礎(chǔ)醫(yī)生的新熱點(diǎn),。
近年來,exosome這種小囊泡正得到廣泛的關(guān)注,。exosome天然存在于體液中,,且攜帶了一些重要的信號分子,有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用,,這使得exosome的市場也在快速擴(kuò)展,。zui近,GEN發(fā)布了有關(guān)exosome市場的分析報(bào)告,,對其現(xiàn)狀和前景做了分析,。這份報(bào)告由生物技術(shù)分析師Enal Razvi撰寫。
exosome是直徑約為30-150 nm的小囊泡,,在30年前被人們所發(fā)現(xiàn),。早期的研究認(rèn)為,exosome執(zhí)行蛋白運(yùn)輸功能,,特異靶定受體細(xì)胞,,交換蛋白和脂類或引發(fā)下游信號事件。直到2007年,,研究人員發(fā)現(xiàn)exosome也運(yùn)輸核酸,,參與細(xì)胞間通訊。至此,,這種小囊泡才被人重視,,并成為熱門的研究對象。
exosome天然存在于所有體液中,,包括血液,、唾液、尿液和母乳,,且其蛋白,、RNA和脂肪成分特異,因此,,exosome有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用,。今年8月,美國NIH為24個細(xì)胞外(exRNA)通訊方面的研究項(xiàng)目提供1700萬美元的資助,,主要關(guān)注exRNA作為潛在的生物標(biāo)志物和療法的臨床實(shí)用性,。
具體來說,exosome的研究方式是分離/捕獲小囊泡,,并拷問它所攜帶的貨物,。就目前而言,人們多采用超速離心,、磁珠免疫捕獲,、沉淀或過濾的方法,對exosome進(jìn)行前期的分離,。之后利用電鏡來分析其大小和形態(tài),,利用流式細(xì)胞儀來分析細(xì)胞表面標(biāo)記,通過Western blot和ELISA等方法對蛋白進(jìn)行分析,,或通過qPCR和新一代測序(NGS)來分析RNA,。
調(diào)查發(fā)現(xiàn),在分離exosome時,,約有56%的人采用超速離心法,,說明這種方法仍是目前的金標(biāo)準(zhǔn)方法。不過,,生物通之前也介紹過,,這種方法缺點(diǎn)也不少:耗時耗力,往往需要8-30個小時,;每次zui多只能處理6個樣品,;需要大量的起始材料;產(chǎn)量不高,。商業(yè)化的exosome提取試劑盒已經(jīng)上市,,更為簡單省事,。
在下游分析方面,36%的研究人員通過Western blot或其他方法來鑒定蛋白,,29%的人員利用qPCR對microRNA表達(dá)譜進(jìn)行分析,,9%利用芯片進(jìn)行microRNA表達(dá)譜分析。同時,,新一代測序的用戶也不少,,13%的人員利用NGS開展microRNA/小RNA研究,9% 開展mRNA研究,。
此外,,目前的大部分工作還是停留在科研階段,后續(xù)的生物標(biāo)志物開發(fā)和驗(yàn)證不多,,而診斷和療法的開發(fā)就更少,。
Razvi認(rèn)為,exosome的定性和定量研究是個快速發(fā)展的市場,。同時,,循環(huán)生物標(biāo)志物的市場也存在著機(jī)遇和挑戰(zhàn)。不過,,無創(chuàng)產(chǎn)前檢測技術(shù)的成功讓人們相信,,循環(huán)生物標(biāo)志物有望在腫瘤及其他疾病的診斷上發(fā)揮作用。
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