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上?;鄯f生物科技有限公司

Chang liver細胞系

時間:2016-5-19閱讀:1141

Chang liver細胞

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幾種乳腺癌細胞的培養(yǎng)

我養(yǎng)的細胞都是乳腺癌細胞,,以下幾種:

1,、MCF-7 是一種很好養(yǎng)的人乳腺癌細胞,培養(yǎng)基用DMEMRPMI1640均可,, 1015%的小牛血清就能長得很好,。一般兩到三天傳一代。傳代也很常規(guī),。吸出培養(yǎng)基,,加入0.25%的胰酶1ml,輕輕晃動培養(yǎng)瓶,,使胰酶流遍瓶壁,,以去除殘余的培養(yǎng)基。再加入2ml胰酶(25ml培養(yǎng)瓶)靜置消化25min,,待細胞縮起變圓,,將胰酶吸出加入培養(yǎng)基3ml吹打成單細胞懸液分瓶即可。我一般都不用緩沖液沖洗,,而直接用胰酶沖洗一下以去除剩余血清的作用,,感覺效果還不錯。因為MCF-7消化較快,,一般不放到培養(yǎng)箱中消化,,以免消化太過,。需要注意的是MCF-7生長較快如不及時傳代可出現(xiàn)整瓶細胞浮起,一般都來不及搶救,。

2,、T47D 也是一種人乳腺癌細胞,培養(yǎng)基用DMEM1015%的小牛血清,,培養(yǎng)方法與MCF-7差不多,,但這種細胞傳代時間長了會極難養(yǎng)。我曾養(yǎng)過一株新從美國購置的,,兩三天傳一代,,長得很旺。后又從國內(nèi)購買一株時間較長的,,要七天傳一代,,而且很嬌氣。

3,、MA891 鼠乳腺癌細胞,,這種細胞比較特殊的是很難消化,容易消化成一團一團的,,如果胰酶的量比常用的多三分之一充分預熱并放入培養(yǎng)箱中消化就會好的多,。傳到1520代細胞就易長成團,從此生長緩慢,,形態(tài)改變,,需要復蘇重養(yǎng)。

我的骨髓間充質(zhì)細胞傳代方法

大鼠骨髓經(jīng)ficoll分層后培養(yǎng),。一周換液2次,。三周后,可以傳代了,。然后大約7天可以傳代一次,。跟das1977網(wǎng)友的方法稍微有點不同。

1. 棄去舊培養(yǎng)液,。

2.預熱的PBS液輕緩漂洗細胞兩遍,,盡量洗去殘余血清,棄去PBS

3 0.25%胰酶,0.05%EDTA37度條件下消化,,約兩到三分鐘,,倒置相差顯微鏡下觀察,細胞縮成圓形漂浮為準,。我還用手輕輕擊打培養(yǎng)皿的兩側(cè),,希望可以加速其消化。實驗室里的人都這么干,我就有樣學樣了,。:)

4.直接加含10%LM-aMEM培養(yǎng)基(或血清)終止消化,。

5.我沒有吹打細胞這個過程哦。下次試試看,。但是結(jié)果還是不錯的,。

6. 離心5分鐘(1200轉(zhuǎn)/分鐘),去上清,。

7.加入PBS液吹打混勻,,再離心一遍。

8. 用培養(yǎng)液重懸細胞,,按12傳代,。 有一次貪心,按14傳代,,結(jié)果細胞數(shù)太少了,,沒有一瓶長好的。5555,。下次不能貪心了,。

9. 補加培養(yǎng)液。75cm2的,,加10-15ml

10.送孵箱培養(yǎng)。

 

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K7M2-WT小鼠骨肉瘤成骨細胞

KB人口腔表皮樣癌細胞

KG1a人髓系白血病細胞

KM-12人大腸癌細胞

KM202L人卵巢癌細胞

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