BT474細(xì)胞形態(tài)

原代細(xì)胞傳代技術(shù)

一,、貼壁細(xì)胞的消化法傳代 
1、吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,。
2,、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中,。
3,、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察,，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí),，棄去消化液,，加入培養(yǎng)液終止消化。
4,、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,，分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。第二天觀(guān)察貼壁生長(zhǎng)情況,。

二、懸浮細(xì)胞的傳代 
1,、直接傳代
① 讓?xiě)腋〖?xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,，將上清吸掉1/2-2/3。
② 用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后,，分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2,、離心法傳代
① 將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),，離心800-1000rpm，5分鐘,。
② 去除上清,，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打使之形成細(xì)胞懸液,。
③ 將細(xì)胞懸液分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

牙髄細(xì)胞的傳代

牙髄細(xì)胞中主要是成纖維細(xì)胞,，貼壁生長(zhǎng),。

傳代方法：

棄培養(yǎng)液（盡量吸干）

加基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置的0.2%trypsin+0.02%EDTA

輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶使消化液浸過(guò)有細(xì)胞的瓶壁

重復(fù)4～5次

迅速吸去消化液

鏡下觀(guān)察細(xì)胞變圓回縮（約1分鐘）

加入*培養(yǎng)液（DMEM+10% FCS）終止反應(yīng)

吹打后，1:2接種,，繼續(xù)培養(yǎng),。

大鼠系膜細(xì)胞傳代

我用的是DMEM低糖培養(yǎng)液，每次傳代前,，將培養(yǎng)液,，PBS，0.25％的胰酶（沒(méi)加edta）,放37度烤箱預(yù)熱（此做法是減少4度的涼液體對(duì)細(xì)胞的刺激,，以防細(xì)胞死亡）,。

每次換液時(shí),，一定要燒培養(yǎng)瓶口,，做好無(wú)菌觀(guān)念,。

先拋棄舊液，用PBS先沖凈殘留的血清,，再加PBS用滴管輕輕的吹打細(xì)胞,，將死細(xì)胞吹打掉。

加胰酶時(shí)注意：若用加edta的,，記住了,，在鏡下看到細(xì)胞在收縮時(shí)，趕快吸出胰酶,，加血清中止消化,。血清可抑制胰酶的活性，但對(duì)edta無(wú)效,。前后大概不到10秒,。若用沒(méi)有加edta的，時(shí)間要適當(dāng)延長(zhǎng),，看到細(xì)胞變?yōu)橛辛Ⅲw感時(shí),，加血清，輕輕拍打,，細(xì)胞就會(huì)散開(kāi),。若團(tuán)塊大，可用滴管吹打,。

動(dòng)作一點(diǎn)要快,，不能讓細(xì)胞離開(kāi)培養(yǎng)箱時(shí)間太長(zhǎng)。