BT474細胞形態(tài)

原代細胞傳代技術(shù)

一、貼壁細胞的消化法傳代 
1,、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,。
2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養(yǎng)瓶,，使瓶底細胞都浸入溶液中,。
3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進行觀察,，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,，在還未漂起時，棄去消化液,，加入培養(yǎng)液終止消化,。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中,，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況,。

二,、懸浮細胞的傳代 
1、直接傳代
① 讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后,，將上清吸掉1/2-2/3,。
② 用吸管吹打形成細胞懸液后,，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
2,、離心法傳代
① 將細胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，離心800-1000rpm,，5分鐘,。
② 去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),，用吸管吹打使之形成細胞懸液,。
③ 將細胞懸液分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

牙髄細胞的傳代

牙髄細胞中主要是成纖維細胞,，貼壁生長。

傳代方法：

棄培養(yǎng)液（盡量吸干）

加基礎培養(yǎng)基配置的0.2%trypsin+0.02%EDTA

輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶使消化液浸過有細胞的瓶壁

重復4～5次

迅速吸去消化液

鏡下觀察細胞變圓回縮（約1分鐘）

加入*培養(yǎng)液（DMEM+10% FCS）終止反應

吹打后,，1:2接種,，繼續(xù)培養(yǎng)。

大鼠系膜細胞傳代

我用的是DMEM低糖培養(yǎng)液,，每次傳代前,，將培養(yǎng)液，PBS,，0.25％的胰酶（沒加edta）,放37度烤箱預熱（此做法是減少4度的涼液體對細胞的刺激,，以防細胞死亡）。

每次換液時,，一定要燒培養(yǎng)瓶口,，做好無菌觀念,。

先拋棄舊液,，用PBS先沖凈殘留的血清，再加PBS用滴管輕輕的吹打細胞,，將死細胞吹打掉,。

加胰酶時注意：若用加edta的，記住了,，在鏡下看到細胞在收縮時,，趕快吸出胰酶，加血清中止消化,。血清可抑制胰酶的活性,，但對edta無效。前后大概不到10秒,。若用沒有加edta的,，時間要適當延長,，看到細胞變?yōu)橛辛Ⅲw感時，加血清,，輕輕拍打,，細胞就會散開。若團塊大,，可用滴管吹打,。

動作一點要快，不能讓細胞離開培養(yǎng)箱時間太長,。