首先要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,，其有類似過氧化物的活性,，因此，在以HRP為標記酶的ELISA測定中,，如血清標本中血紅蛋白濃度較高,，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色,。血清標本如是以無菌操作分離,，則可以在2～8 ℃下保存一周，如為有菌操作,，則建議冰凍保存,。樣本的長時間保存，應在-70 ℃以下,。樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用,；二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾,。標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測,。冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融,。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結果,。此外,，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩,，反復顛倒混勻即可,。
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本,，加酶結合物,，加底物。凍結血清融解后,，蛋白質(zhì)局部濃縮,，分布不均,，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡,，可上下倒置混和,，不要在混勻器上強烈振蕩。制備血漿標本需借助于抗凝劑,，而血清標本只要待血清天然凝固,、血塊收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液,，再在其加入血清標本,，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。一般說來,，在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存,?？捎米鱁LISA測定的標本十分廣泛，體液(如血清 ),、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液,、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體 或抗原成份，ELISA試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保留,。
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