慧穎生物新研發(fā)大鼠（FT4）ELISA試劑盒,，采用雙抗體一步法夾心ELISA方法,，定量檢測(cè)大鼠體液中FT4中含量。更,，更快速,，產(chǎn)品一經(jīng)上市，已經(jīng)有很多客戶重復(fù)使用,，

產(chǎn)品全稱：大鼠游離甲狀腺素（FT4）ELISA試劑盒

別名：大鼠FT4試劑盒,；大鼠游離甲狀腺素ELISA試劑盒,；大鼠游離甲狀腺素（FT4）檢測(cè)試劑盒；大鼠游離甲狀腺素（FT4）酶免試劑盒,。

使用說(shuō)明書(shū)

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被游離甲狀腺素（FT4）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的游離甲狀腺素（FT4）呈正相關(guān),。用

酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度,。

樣品收集,、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1. 試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20 分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。

2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。4. 所有液體組分使用前充分搖勻,。

試劑盒組成

名稱96孔配置48孔配置備注

微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無(wú)

標(biāo)準(zhǔn)品（24pmol/L） 0.5mL 0.5mL 無(wú)

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液6mL 3mL 無(wú)

樣本稀釋液6mL 3mL 無(wú)

檢測(cè)抗體-HRP 10mL 5mL 無(wú)

20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

底物A 6mL 3mL 無(wú)

底物B 6mL 3mL 無(wú)

終止液6mL 3mL 無(wú)

封板膜2 張2 張無(wú)

說(shuō)明書(shū)1 份1 份無(wú)

自封袋1 個(gè)1 個(gè)無(wú)

注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液倍比稀釋為24,、12、6,、3,、1.5、0.75 pmol/L

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20 稀釋?zhuān)? 份的20×洗滌緩沖液加19 份的蒸餾水,。

洗板方法

1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干,，如此洗板5 次。

2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min,，洗板5 次。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔。標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；待測(cè)樣本孔先加樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加,。

3. 除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

4. 棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

5. 每孔加入底物A,、B 各50μL,，37℃避光孵育15min,。

6. 每孔加入終止液50μL，15min 內(nèi),，在450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值,。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),，對(duì)應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo),，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值,。

試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值,，大于等于

0.9900。

2. 靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于0.1 pmol/L,。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng),。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%,。

5. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存。

6. 有效期：6 個(gè)月

此說(shuō)明書(shū)僅供參考,，請(qǐng)以隨貨英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),！