產(chǎn)品名稱：大鼠促甲狀腺素釋放激素（TRH）ELISA試劑盒

別名：大鼠TRH試劑盒,；大鼠促甲狀腺素釋放激素ELISA試劑盒；大鼠促甲狀腺素釋放激素（TRH）檢測試劑盒,；大鼠促甲狀腺素釋放激素（TRH）酶免試劑盒

慧穎生物所銷售的ELISA試劑盒采用雙抗一步法,，結(jié)果更，更節(jié)約時間,。

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被促甲狀腺素釋放激素（TRH）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的促甲狀腺素釋放激素（TRH）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），

計算樣品濃度,。

樣品收集,、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。

3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。

2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3. 嚴格按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液量及順序進行溫育操作。

4. 所有液體組分使用前充分搖勻,。

試劑盒組成

名稱96孔配置48孔配置備注

微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無

標(biāo)準品（8μIU/ml） 0.5mL 0.5mL 無

標(biāo)準品稀釋液6mL 3mL 無

樣本稀釋液6mL 3mL 無

檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無

20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋

底物A 6mL 3mL 無

底物B 6mL 3mL 無

終止液6mL 3mL 無

封板膜2 張2 張無

說明書1 份1 份無

自封袋1 個1 個無

注：標(biāo)準品用標(biāo)準品稀釋液倍比稀釋為：8,、4、2,、1,、0.5、0.25μIU/ml

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋,，即1 份的20×洗滌緩

沖液加19 份的蒸餾水,。

洗板方法

1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5 次,。

2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5 次,。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準品孔和樣本孔,。標(biāo)準品孔各加不同濃度的標(biāo)準品50μL,；待測樣本孔先加樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加,。

3. 除空白孔外,，標(biāo)準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

4. 棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機洗板）。

5. 每孔加入底物A,、B 各50μL,，37℃避光孵育15min。6. 每孔加入終止液50μL,，15min 內(nèi),，在450nm 波長處測定各孔的

OD 值。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準曲線：在Excel 工作表中,，以標(biāo)準品濃度作橫坐標(biāo),，對應(yīng)

OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準品線性回歸曲線,，按曲線方程計算各樣

本濃度值,。

試劑盒性能

1. 準確性：標(biāo)準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值，大于等于

0.9900,。

2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于0.1μIU/ml,。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存,。

6. 有效期：6 個月

以上為中文說明書,，僅供參考，請以隨貨英文說明書為準,，歡迎您的來電,！