細胞名稱

MCF7-ADR細胞

貨號

A006

種屬

人

細胞來源

ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進

生長特性

貼壁  上皮樣

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基： 80% RPMI-1640 +20% FBS ++10ug/ml 胰島素+1000ng/ml ADR（推薦HAKATA優(yōu)等胎牛血清,，貨號:HN-FBS-50）

溫度：37℃     氣相：95%空氣,5% CO2

傳代

1. 用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒,，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺,，打開瓶口,，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代,，一般2到3天換一次液；

2.待細胞長至80-90%時,，需要對其進行傳代,，推薦傳代比例為1:2至1:4；

3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預熱,，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去,。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶,，置于37°孵育消化（次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓,、輕拍瓶壁見細胞脫落為zui佳消化時間,，記錄zui佳消化時間，以便于下次消化）,，消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化,。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落,，然后收集細胞懸液,，1200rpm離心5min，棄上清,，加入*培養(yǎng)基重懸細胞,，進行傳代。

保存

凍存條件：80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO

(備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100）,，用4度保存的冷凍液直接重懸細胞,，不能預熱后使用。)

保存條件：液氮存儲

供應限制

僅供研究之用

常見問題及解決方案

1.培養(yǎng)瓶有破裂,，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染,，所以我們會及時安排幫老師解決。

2.收到細胞后盡快更換為含 20%血清的新鮮培養(yǎng)基,，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加 20%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過 24 小時）

3.細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封,，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱,。1-2小時后觀察，如細胞大部分又貼回瓶底,，表明細胞活力正常,，剩余漂浮的細胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,，細胞生長至匯合度80%,，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁,，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察,，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導,，直到問題解決,。