A549/DDP細胞，A549/DDP培養(yǎng),；中文名稱：人A549耐藥細胞株,。慧穎提供A549/DDP細胞價格,，形態(tài),，來源，STR鑒定，細胞特征特性,，培養(yǎng)條件,，操作注意事項，訂購流程,，售后說明等,。慧穎生物注重產(chǎn)品品質(zhì),，提供zui的產(chǎn)品和服務(wù),，自公司成立以來，獲得了同行業(yè)的*,。六月,，是繁忙的，六月是收獲的季節(jié),，沉甸甸的麥穗,，已經(jīng)顆粒歸倉。六月我們一起前行,，成就人生,，慧穎祝您萬事如意，心想事成,。

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產(chǎn)品名稱：A549/DDP細胞 人耐藥肺腺癌

形態(tài)：上皮細胞 貼壁

來源：人 肺癌

培養(yǎng)基：1640 + 12%胎牛血清

DDP維持濃度：2ug/ml

消化液：0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA

傳代比例： 1：2~ 1：3

該細胞的培養(yǎng)應(yīng)先在不加DDP的情況下傳代,，傳代比例根據(jù)該細胞的濃度可以選擇1：2或1：3的比例進行,，成功傳代后，DDP可以分三次加入,，這樣細胞的適應(yīng)性會好一些,，加DDP后觀察細胞生長正長后，分次加到維持濃度2ug/ml,。

慧穎細胞庫熱賣產(chǎn)品：9204細胞,，MOLM14細胞，WB-F344細胞,，U251細胞,，TMNE細胞，THP-1細胞,，SW620細胞,，HL-60細胞,，SP2/0細胞，SMMC-7721【SMMC7721】細胞,，L-02細胞,，SK-N-SH細胞，SGC7901/VCR細胞,，SGC-7901細胞,，RAW264.7細胞，Ramos細胞,，QSG7701細胞,，PC-12細胞，P3X.65Xg.653細胞,，NIH3T3細胞,，MG-63細胞,，MDA-MB-231細胞,，MDA-MB-453細胞，A549細胞,，A549/DDP細胞,，MC-3T3-E1【MC3T3-E1】細胞，JEG-3細胞,，JB6-C30細胞,，HUVEC-12細胞，HT-29細胞,，CTLL-2細胞,，HNE2細胞，HO-8910細胞,，HME2細胞,，HK-2細胞，HFF細胞,，HepG2細胞,，HCT-8/VCR細胞，HCT-116細胞,，GH3細胞,，Cos-7細胞，CHO細胞,，CaSKi細胞,，Caov-3細胞，BxPC-3細胞,，BRL細胞,，BEL7404細胞,，B16細胞，A375細胞,，A431細胞,，5-8F細胞，BGC 823細胞,，NCI-H446細胞,，hBMECs細胞等。

封閉

在轉(zhuǎn)膜之后,，也就是抗體孵育之前,，需要對膜進行封閉。封閉是為了使抗體僅僅只能跟特異的蛋白質(zhì)結(jié)合而不是和膜結(jié)合,。常用的封閉液有BSA,，脫脂奶粉，血清等,，一般用的是脫脂奶粉,。脫脂奶粉有些特殊情況是不適用的 ，脫脂奶粉不能與生物素化或伴刀豆蛋白標(biāo)記的抗體一起使用,；不能用于磷酸化抗體對蛋白磷酸化的檢測,；不能用于堿性磷酸酶（AP）顯示方法。

抗體孵育——WB真正的難點：抗體的使用是一種藝術(shù),，一種抗體一個脾氣,。

對WB結(jié)果有決定性影響的因素是抗體的效價和如果正確使用手中的抗體。 無論你如何提高自己的轉(zhuǎn)膜技術(shù),，和低效之間往往只有數(shù)倍的差異,， 而抗體的效價可以差數(shù)千倍以上；同樣,，正確使用抗體可以保證抗體效價 不被過分的拮抗,，謀求特異性和非特異性背景之間差異的zui大化。

一抗：*抗體能和非抗體性抗原特異性結(jié)合的蛋白,，包括單克隆抗體和多克隆抗體,；二抗：第二抗體能和一抗結(jié)合，即抗體的抗體,，其主要作用是檢測抗體的存在,，放大一抗的信號。一般二抗都會偶聯(lián)可以檢測的標(biāo)記（如熒光,、放射性,、化學(xué)發(fā)光或顯色基團），用來檢測一抗,；如果一抗本身偶聯(lián)有這些標(biāo)記,，則不需要二抗,，就是所謂的直接WB。

那么如何正確的來選擇二抗呢,？*根據(jù)一抗的種屬來源選擇二抗,；第二根據(jù)一抗的類型選擇二抗，根據(jù)單體數(shù)量和重鏈分類,，將抗體分為IgA,，IgD，IgE,，IgG,，IgM五類。其中又可分為幾個亞型：IgA1-2,，IgG1a,，2a，2b,，3,，IgM1-2。

顯色

酶促反應(yīng)可以搭配不同的底物從而實現(xiàn)不同的顯色方法：化學(xué)發(fā)光Chemiluminescent 和底物顯色Colormetirc/Chromogen,，前者靈敏度很高——隨著各大廠家努力開發(fā)研制靈敏度更高的發(fā)光底物,，化學(xué)發(fā)光法的靈敏度已經(jīng)達到pg別,，甚至還有 Femto級別的,，靈敏度超過了同位素；而后者由于直接顯色而操作簡便且成本低,。zui為大家熟悉當(dāng)數(shù)辣根過氧化物酶HRP（Horseradish Peroxidase,，屬于過氧化物酶POD類）和堿性磷酸酶AP（Alkaline Phosphatase），此外還有比較少見的葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase）,、β半乳糖苷酶 β-Galactosidase ,。

常見問題分析：

1.曝光后背景過高且不均勻

封閉不充分：延長封閉時間，更換合適的封閉劑,；一抗?jié)舛冗^高：增加一抗稀釋倍數(shù),；抗體孵育溫度過高：4℃孵育；二抗非特異性結(jié)合或與封閉劑交叉反應(yīng)：設(shè)置二抗對照（不加一抗）,，降低二抗?jié)舛取?/span>

洗膜不充分：增加洗膜次數(shù)

2.沒有陽性條帶或很弱

一抗,、二抗不匹配：訂購試劑時認(rèn)真選取一抗與組織種屬，一抗與二抗或底物與酶系統(tǒng)之間相匹配的抗體及底物,，可通過設(shè)置內(nèi)參驗證二級系統(tǒng)的有效性,； 更換更好的抗體；一抗,，二抗?jié)舛鹊停涸黾涌贵w濃度,，延長孵育時間封閉劑與一抗有交叉反應(yīng)：封閉時使用溫和的去污劑,，更換封閉劑樣本中無靶蛋白或靶蛋白含量過少，設(shè)置陽性對照,，如果陽性對照有結(jié)果,，但標(biāo)本沒有則可能是標(biāo)本中不含靶蛋白或是靶蛋白含量太低，后者可增加樣本上樣量,；轉(zhuǎn)膜不充分還洗膜過度：使用麗春紅S檢測轉(zhuǎn)膜效果,，PVDF膜需浸透，正確的轉(zhuǎn)膜操作,，勿過度洗膜,；曝光時間過短：延長曝光時間，更換更靈敏的發(fā)光液

3.背景有白色/黑色斑

轉(zhuǎn)膜時有氣泡或抗體分布不均：盡量除去氣泡,，抗體孵育時保持搖動,；封閉劑溶解不充分有顆粒狀

A549/DDP細胞，A549/DDP培養(yǎng)常見的污染如下：

1,、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形,，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,，對細胞生長影響明顯。

2,、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的,，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天,，仍清亮,，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,，可看到明顯的菌絲,，細胞仍可生長，但時間長之后,，細胞的活力狀態(tài)變差,，

用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅,?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。

3,、支原體：黑色的,，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁,，原體感染,，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測,，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去,。支原體感染細胞以后,，細胞病變不很明顯，只是慢慢凋亡,。

4,、黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播,，低倍下為黑色點狀,，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的,，一般不會太影響,，細胞還是可以用的。

5,、真菌：一般培養(yǎng)液清亮,，不變色，鏡下有絲狀物,，有些真菌開始很像死細胞碎片,，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀,，不象細胞碎片分不清,，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn),，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了,。

6、原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁,，顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多,，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,，而且細胞狀態(tài)不好,，邊緣不清楚，細胞不透亮,。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng),。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小,，細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長,，只有當(dāng)他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長,，zui終形成惡性循環(huán)。

A549/DDP細胞,，A549/DDP培養(yǎng)運輸：凍存的細胞干冰運輸,，復(fù)蘇的細胞冰袋運輸。冬季我們會選擇全血清包被細胞運輸,，運輸途中細胞處于休眠狀態(tài),，避免天氣過冷導(dǎo)致的細胞死亡。