HIEC細(xì)胞 HIEC細(xì)胞 HIEC細(xì)胞

慧穎熱賣細(xì)胞代號(hào)：HIEC細(xì)胞，SW48細(xì)胞,，HT-22細(xì)胞,，RBE細(xì)胞,，NB4細(xì)胞，NCM460細(xì)胞,，CCD-18Co細(xì)胞,、HL-60細(xì)胞，LTEP-a-2細(xì)胞,，MC3T3-L1細(xì)胞,，CaCo2細(xì)胞，SK-BR-3細(xì)胞,，Y79細(xì)胞,，SK-N-DZ細(xì)胞，Ramos細(xì)胞,，MHCC97-H細(xì)胞,，MHCC97-L細(xì)胞，HSF細(xì)胞,，MKN-45細(xì)胞,，MKN-1細(xì)胞,，SGC-7901/DDP細(xì)胞,，，KG-1a細(xì)胞,，HL-60細(xì)胞,，MV4-11細(xì)胞，U937細(xì)胞,，MOLM-13細(xì)胞,，MOLM-14細(xì)胞，K562細(xì)胞,，CCRF-CEM細(xì)胞,，HS 505.T細(xì)胞，SK-N-SH細(xì)胞等,。

HIEC細(xì)胞 相關(guān)培養(yǎng)技術(shù) 知識(shí)：

【初代培養(yǎng)原理】

將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機(jī)械方法處理,，分散成單細(xì)胞,，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存,、生長和繁殖,，這一過程稱原代培養(yǎng)。

儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37℃）,，培養(yǎng)瓶,、青霉素瓶,、小玻璃漏斗、平皿,、吸管,、移液管、紗布,、手術(shù)器械,、血球計(jì)數(shù)板、離心機(jī),、水浴箱（37℃）

材料：動(dòng)物組織塊

試劑：1640培養(yǎng)基（含20%小牛血清）,，0.25%胰酶，Hank′s液,，碘酒

【初代消化培養(yǎng)法】

（1）準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面,，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手,、75%酒精擦拭手至肘部,。

（2）布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽,。

（3）處理組織：把組織塊置于燒杯中,，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污,；如懷疑組織可能污染,，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。

（4）剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,，以便于消化,。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中,，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞,。

（5）消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可,，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次,，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨谩Ｏ瘯r(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定,。

（6）分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí),，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞,，立即終止消化,，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊,。低速（500~1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘,，吸出上清,，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

（7）計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大,，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中,。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說,，pH要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色,，如顏色偏黃,，說明液體變酸，可用NaHCO23調(diào)整,。

（8）培養(yǎng)：置于36.5℃溫箱培養(yǎng),，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,，紗布塞易生霉菌,，每次換液時(shí)需要換新塞。

【初代組織塊培養(yǎng)法】

《1》剪切：把組織小塊置于小燒杯或青霉素小瓶中,，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,，吸靜Hanks液，用眼科剪反復(fù)剪切1mm3塊為止,。

《2》擺布：用彎頭吸管吸取若干小塊,，置于培養(yǎng)瓶中，用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養(yǎng)瓶底部,，小塊相互距離以0.5cm為宜，每一25ml培養(yǎng)瓶底可擺布20~30塊,。

《3》輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,，另瓶底向上，注意翻瓶時(shí)勿另組織小塊流動(dòng),，塞好瓶塞,，置36.5℃溫箱培養(yǎng)2小時(shí)左右（勿超過4小時(shí)），使小塊微干涸,。

《培養(yǎng)》從微箱中取出培養(yǎng)瓶,，開塞，46度斜持培養(yǎng)瓶,，箱瓶底腳部輕輕注入培養(yǎng)液少許,，然后緩緩再把培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)過來，讓培養(yǎng)液慢慢覆蓋附于瓶地上的組織小塊,。置溫箱中靜止培養(yǎng),。待細(xì)胞從組織塊游出數(shù)量增多后,。再補(bǔ)加培養(yǎng)液。

【傳代培養(yǎng)法原理】

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,，已基本上飽和,，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）,。 傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程,。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

【材料和試劑】

1）細(xì)胞：貼壁細(xì)胞株

2）試劑：0.25％胰酶,、1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）

3）儀器和器材：倒置顯微鏡,，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶,、吸管,、廢液缸等

【操作步驟】

1）吸除培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。

2）向瓶內(nèi)加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許,，以能覆滿瓶底為限,。

3）置溫箱中2~5分鐘，當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮,，細(xì)胞間隙增大后,，立即終止消化。

4）吸除消化液,，向瓶內(nèi)注入Hanks液數(shù)毫升,，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘余消化液沖掉,。注意加Hanks液沖洗細(xì)胞時(shí),，動(dòng)作要輕，以免把已松動(dòng)的細(xì)胞沖掉流失,，如用胰蛋白酶液單獨(dú)消化,，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗,，直接加入培養(yǎng)液,。

5）用吸管吸取營養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液,。

6）計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后,，把細(xì)胞懸液分成等份分裝入數(shù)個(gè)培養(yǎng)瓶中，置溫箱中培養(yǎng),。