1.試劑和溶液

乙醇: 無(wú)水乙醇,，95%乙醇,，85%乙醇，70%乙醇

抗原修復(fù)液: 0.01M的檸檬酸鈉緩沖液：58.82g檸檬酸三鈉及7.56g檸檬酸溶于200ml純水,，調(diào)pH至 6.0,，純水1:100稀釋為工作液

3%過(guò)氧化氫-甲醇: 30%的過(guò)氧化氫與無(wú)水甲醇1:9稀釋

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L純水,，調(diào)pH至 7.4

洗滌液: 1×PBS：純水稀釋10× PBS,；1× PBST：含0.05% Tween-20 的1×PBS（1×PBST）super block，生物素標(biāo)記的UltraTekAnti-Polyvalent二抗,，酶標(biāo)親和素UltraTek HRP,，DAB

顯色試劑盒：Cat. KT1002a

抗體稀釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽酸-乙醇：0.5～1%鹽酸,，95.0～95.5%乙醇

蘇木素：蘇木精2g溶于250ml無(wú)水乙醇，十六水合硫酸鋁17.6g 溶與750ml純水,，以上溶液充分混合,，加入碘酸鈉 0.2g和冰醋酸20ml

2.實(shí)驗(yàn)步驟

1組織固定：烘箱溫度65-75℃ 30min或者65℃隔夜；

2脫蠟：二甲苯浸泡三次,，每次10分鐘,；

3水化：依次經(jīng)過(guò)無(wú)水乙醇，95%乙醇,，85%乙醇,，70%乙醇浸泡，每次5min,；

4洗滌：自來(lái)水沖洗1次,，PBS浸泡3min；

5抗原修復(fù)：放入稀釋100倍的檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0) 中,，高壓鍋煮沸10min,，常溫冷卻30min；

6洗滌：純水浸泡2次,，PBS浸泡1次,，每次3min；

7滅活酶：室溫下3%過(guò)氧化氫-甲醇暗處處理切片15min,；

8洗滌：純水浸泡1次,，PBS浸泡2次，每次3min,；

9封閉：加入適當(dāng)體積的super block（KT1002a Reagent A）,，37℃溫箱孵育5min；

10洗滌：純水浸泡1次,，PBS浸泡2次,，每次3min；

11一抗：加入反應(yīng)體積為0.15ml,，適合濃度的一抗, 37℃ 濕盒孵育60min。

12洗滌：PBST浸泡3次,，PBS浸泡1次,，每次3min；

13加入適當(dāng)體積生物素標(biāo)記的UltraTek Anti-Polyvalent的二抗（KT1002a Reagent B）,，37℃濕盒孵育10min,；

14洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次,，每次3min,；

15加入適當(dāng)體積酶標(biāo)親和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕盒孵育10min,；

16洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次,，每次3min,；

17顯色：滴加適量DAB顯色液(KT1003a)至切片上，室溫顯色1~5min,，自來(lái)水沖洗,；

18復(fù)染：蘇木素染色5min，蒸餾水沖洗5min,；

19分化： 0.5%鹽酸乙醇混合液中分化,，自來(lái)水沖洗3-4次， PBS中浸泡10-20秒返藍(lán),，自來(lái)水沖洗2次,。

20脫水：經(jīng)過(guò)70%乙醇，85%乙醇,，95%乙醇,，無(wú)水乙醇浸泡，每次5min,；

21透明：二甲苯浸泡2次,，每次10-15min；

22封片：晾干后加中性樹(shù)膠,，蓋玻片封片,；

23結(jié)果：顯微鏡觀(guān)察，記錄結(jié)果,。

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慧穎生物提供腫瘤耐藥細(xì)胞株的建立與服務(wù),?；鄯f生物可以根據(jù)客戶(hù)要求構(gòu)建相應(yīng)的細(xì)胞系。腫瘤耐藥株的建立和應(yīng)用,，能夠給予臨床zui直接的指導(dǎo),。

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主要提供一下耐藥細(xì)胞株的建立：

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

人乳腺癌紫杉醇耐藥株

人肺腺癌紫杉醇耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株

人口腔上皮癌長(zhǎng)春新堿耐藥株

人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株

人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株

人卵巢癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉素耐藥株

人卵巢癌紫杉醇耐藥株

人胃癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉素耐藥株

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人乳腺癌抗雌激素耐藥株

人乳腺癌Tamoxifen耐藥株

小鼠激素依賴(lài)性乳腺癌細(xì)胞

服務(wù)周期

1. 有現(xiàn)成的細(xì)胞系：6個(gè)月，具體時(shí)間根據(jù)客戶(hù)的要求以及樣本數(shù)而定,；

2. 沒(méi)有已建成的細(xì)胞系,，需要構(gòu)建，公司構(gòu)建時(shí)間約為15個(gè)月左右,。

公司熱賣(mài)耐藥株：K562/Adr細(xì)胞,，BIU-87/Adr細(xì)胞，A549/DDP細(xì)胞，NCI-H446/VP細(xì)胞,，A549/Taxol細(xì)胞,，A549/DDP細(xì)胞，H1975/培美曲塞細(xì)胞,，BEL-7402/FU細(xì)胞,，HCT-8/VCR細(xì)胞，HCT-8/FU細(xì)胞,，HCT-8/Taxol細(xì)胞,，A2780/Taxol細(xì)胞，A2780/DDP細(xì)胞,，MCF-7/Adr細(xì)胞,，Eca-109/VCR細(xì)胞，SGC-7901/DDP細(xì)胞,，PATU-8988/FU細(xì)胞,，PATU-8988/FU細(xì)胞，HCT116/L-OHP細(xì)胞,，LOVO/ADR細(xì)胞,，SGC7901/DDP細(xì)胞，SGC7901/VCR細(xì)胞,，L1210/DDP細(xì)胞,，H446/VP細(xì)胞，COC1/DDP細(xì)胞,，HepG2/ADR細(xì)胞等,。