1.試劑和溶液

1）轉(zhuǎn)印緩沖液：0.025M Tris base , 0.187 M甘氨酸 , 25%甲醇

2）氨基黑溶液：0.1% 酸性黑10B

3）1×TBST：25mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 0.2 M NaCl ,0.1%Tween 20

4）封閉液：TBST配制的5%牛奶

5）抗體稀釋液：TBST配制的5%牛奶

6）顯色系統(tǒng)：ECL顯色

2.實(shí)驗(yàn)步驟

1電泳：將裂解液進(jìn)行SDS-PAGE電泳,，80v,，30分鐘，120v,，90分鐘,；

2轉(zhuǎn)膜：PVDF膜在甲醇中浸泡約30秒左右，濾紙浸泡在轉(zhuǎn)印緩沖液預(yù)濕,，半干法轉(zhuǎn)印到PVDF膜上,，10v，150分鐘,；

3染色：氨基黑染色5分鐘,，甲醇褪去背景色，觀察條帶,；

4膜活化：將PVDF膜置于甲醇活化1min,，用純水洗膜2次后再用TBST洗滌3次；

5封閉：將膜條置于5%牛奶或2% BSA中,，室溫混搖2h,；

6一抗孵育：將待檢抗體用3%牛奶或2% BSA稀釋到合適濃度（參照抗體說(shuō)明書(shū)，根據(jù)客戶(hù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，稀釋度上下浮動(dòng)一個(gè)數(shù)量級(jí)都為正常）,，將膜放入對(duì)應(yīng)的已稀釋待檢樣品中，置4℃混搖孵育隔夜,；

7洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3×5min,；

8二抗孵育：將膜取出放入稀釋好的HRP標(biāo)記的二抗（參照二抗說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋?zhuān)┲校覝鼗鞊u2h,；

9洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3×5min,；

10ECL顯色：將膜取出放入混勻的ECL顯色液中，孵育3min，將膜取出貼在有熒光角標(biāo)的膠片上,，迅速用保鮮膜包好；

11曝光：把底片放在暗盒中,，根據(jù)熒光強(qiáng)度分別對(duì)X光膠片作不同時(shí)間段的曝光,，曝光結(jié)束后，將底片取出,，1min顯影,，30s清洗，1min定影,，30s清洗,，晾干；

12結(jié)果分析：用掃描儀將曝光后的X光膠片掃描,，做后續(xù)結(jié)果分析,。

購(gòu)買(mǎi)放心細(xì)胞株細(xì)胞系，耐藥濃度倍數(shù)高穩(wěn)定耐藥株,，選擇慧穎生物

慧穎生物提供腫瘤耐藥細(xì)胞株的建立與服務(wù),。慧穎生物可以根據(jù)客戶(hù)要求構(gòu)建相應(yīng)的細(xì)胞系,。腫瘤耐藥株的建立和應(yīng)用,，能夠給予臨床zui直接的指導(dǎo)。

服務(wù)內(nèi)容 價(jià)格 服務(wù)周期

藥物濃度梯度遞增法建立耐藥細(xì)胞株 詢(xún)價(jià)6個(gè)月

大劑量間歇誘導(dǎo)法建立耐藥細(xì)胞株 詢(xún)價(jià)6個(gè)月

主要提供一下耐藥細(xì)胞株的建立：

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

人乳腺癌紫杉醇耐藥株

人肺腺癌紫杉醇耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株

人口腔上皮癌長(zhǎng)春新堿耐藥株

人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株

人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株

人卵巢癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉素耐藥株

人卵巢癌紫杉醇耐藥株

人胃癌順鉑耐藥株

人白血病阿霉素耐藥株

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株

人乳腺癌抗雌激素耐藥株

人乳腺癌Tamoxifen耐藥株

小鼠激素依賴(lài)性乳腺癌細(xì)胞

服務(wù)周期

1. 有現(xiàn)成的細(xì)胞系：6個(gè)月,，具體時(shí)間根據(jù)客戶(hù)的要求以及樣本數(shù)而定,；

2. 沒(méi)有已建成的細(xì)胞系，需要構(gòu)建,，公司構(gòu)建時(shí)間約為15個(gè)月左右,。

公司熱賣(mài)耐藥株：K562/Adr細(xì)胞，BIU-87/Adr細(xì)胞,，A549/DDP細(xì)胞,，NCI-H446/VP細(xì)胞，A549/Taxol細(xì)胞,，A549/DDP細(xì)胞,，H1975/培美曲塞細(xì)胞，BEL-7402/FU細(xì)胞,，HCT-8/VCR細(xì)胞,，HCT-8/FU細(xì)胞，HCT-8/Taxol細(xì)胞,，A2780/Taxol細(xì)胞,，A2780/DDP細(xì)胞，MCF-7/Adr細(xì)胞，Eca-109/VCR細(xì)胞,，SGC-7901/DDP細(xì)胞,，PATU-8988/FU細(xì)胞，PATU-8988/FU細(xì)胞,，HCT116/L-OHP細(xì)胞,，LOVO/ADR細(xì)胞，SGC7901/DDP細(xì)胞,，SGC7901/VCR細(xì)胞,，L1210/DDP細(xì)胞，H446/VP細(xì)胞,，COC1/DDP細(xì)胞,，HepG2/ADR細(xì)胞等。