細胞培養(yǎng)中常見的污染情況總結(jié)如下

常見的污染如下：

1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,，根據(jù)感染細菌的不同,，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,，對細胞生長影響明顯,。

仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠,，壓力足夠,！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染,，一定要注意,！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！

可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理

2,、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的,，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天,，仍清亮,，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,，可看到明顯的菌絲,，細胞仍可生長，但時間長之后,，細胞的活力狀態(tài)變差,，

用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅,?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。

CO2孵箱被霉菌污染后,，可把所有細胞暫時轉(zhuǎn)移,，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板,，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個小時,，使其蒸汽彌漫,。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞,。孵箱應(yīng)定期清潔（2月左右）,，尤其在多雨的季節(jié)。

其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照,。

預(yù)防霉菌污染,，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗；但細胞一旦污染,，很難挽救,，制霉菌素或放線菌素D或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞,。,，將環(huán)境*消毒，如果所有細胞都污染,，可能是系統(tǒng)污染,，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染,，可能是操作問題,，就要注意操作

3、支原體：黑色的,，好象多為多形,，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染,，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測,，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去,。支原體感染細胞以后,，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去,。

用泰樂菌素,，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養(yǎng),，無任何不良反應(yīng),。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度,。

4,、黑蛟蟲：可以穿透濾膜,，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀,，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的,，一般不會太影響,，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好,，且觀測到的運動物無明顯增多,，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化,，可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象,。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失,，除更換血清外無須特殊處理,。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度,，以提高細胞的生存率,。

5、真菌：一般培養(yǎng)液清亮,，不變色,，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片,，只是它很多很多的小塊很清楚,，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清,，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物,。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn),，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了,，也很難救活了。

6,、原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁,，顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多，輕微活動,，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚,，細胞不透亮,。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng),。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小,，細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長,，只有當(dāng)他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長，zui終形成惡性循環(huán),。

污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題,、操作問題、環(huán)境問題等等

關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況,，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細胞）,，37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長 就是操作的問題,。

也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）,。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉(zhuǎn)染,、檢測細胞某項指標(biāo)前一定要撤去雙抗,，以避免影響實驗結(jié)果。

1,、孵箱應(yīng)定期用三氧機消毒 或者 紫外光照射,，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水

2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素

3,、超凈臺的風(fēng)機不能過大,，風(fēng)機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染

4,、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后,，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作,。

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