細(xì)胞活力檢測(cè)

    在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞,，總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力。由組織中分離細(xì)胞一般要檢查活力,，以了解分離的過(guò)程對(duì)細(xì)胞是否有損傷作用,；復(fù)蘇后的細(xì)胞也要檢查活力，了解凍存和復(fù)蘇的效果,。細(xì)胞懸液制備后,，zui常用活體染料臺(tái)盼藍(lán)對(duì)細(xì)胞染色，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。

    正常細(xì)胞胞膜完整,，臺(tái)盼藍(lán)不能透過(guò)活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色,；而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞胞膜通透性增加,，臺(tái)盼藍(lán)能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色（藍(lán)色）。

操作步驟：

1. 配制4%臺(tái)盼藍(lán)母液：稱取4g臺(tái)盼藍(lán),，加少量蒸餾水研磨,，加雙蒸水至100mL，用濾紙過(guò)濾,，4℃保存,。使用時(shí)用PBS稀釋至0.4%。

2. 胰酶消化貼壁細(xì)胞,，制備單細(xì)胞懸液,，并作適當(dāng)稀釋（106 cells/mL）。

3. 取少量細(xì)胞懸液與0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液以9:1混合,，輕輕吹打混勻,，染色2~3min。

4. 顯微鏡下觀察,，死細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大,，無(wú)光澤；活細(xì)胞保持正常形態(tài),，無(wú)色透明有光澤。若需計(jì)算活細(xì)胞率則將染色的細(xì)胞懸液滴入細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。

活細(xì)胞率（%）= 活細(xì)胞總數(shù)/（活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù)）×100%

注意事項(xiàng)：臺(tái)盼藍(lán)染細(xì)胞時(shí),，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。否則,，部分活細(xì)胞也會(huì)著色,，會(huì)干擾計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。