葡聚糖凝膠柱的使用方法：

(1) 預(yù)處理
稱取Sephadex G-25（50－100目）約5g，加入蒸餾水100ml,，置室溫下3h進(jìn)行溶脹,。
(2) 裝柱
凝膠層析柱的直徑與柱長之比一般為1:15,。柱的底部用裝有細(xì)玻璃管的橡皮塞塞緊，用洗凈的玻璃絲（約200目尼龍布）墊底或購買類似規(guī)格的商品柱,。然后將柱垂直安裝好,，先加入1/3柱體積蒸餾水，接著將溶脹好的凝膠邊攪勻邊連續(xù)裝入,，使它們在柱內(nèi)自然沉降,。同時大開下口慢速流出蒸餾水。裝柱后的凝膠必須均勻,，不能有氣泡或明顯條紋,。否則,，必須到出重裝,，裝好后，用蒸餾水平衡2－3h即可加樣品分離,。

(3) 加樣

加樣前,，首先把柱內(nèi)凝膠上面多余的蒸餾水放出，直到柱內(nèi)液面與凝膠表面相齊（或留一極薄液層）為止,。然后,，由柱的上端加水解液2ml，注意不要讓溶液把凝膠沖松浮起,，加完樣品后,，打開下口緩慢放出液體至液面與凝膠面相齊，再用少量蒸餾水沖洗原來盛樣品的容器2－3次,，待全部進(jìn)入層析柱后,，即可進(jìn)行洗脫。
(4) 洗脫與收集
洗脫時,，用蒸餾水作洗脫劑,，并且要連續(xù)不斷地進(jìn)行，使凝膠柱上端保持一定的液層,，防止凝膠柱表面的液體流干,。本實驗洗脫液流出的速度應(yīng)控制在0.8－1.0ml/min。洗脫液的收集采用分管連續(xù)順序收集,，每管收集3ml,，共收集10管。據(jù)經(jīng)驗,，4或5號管核苷酸濃度zui大,，可作為層析鑒定的樣品液。但因?qū)游鲋L度的差異,，管號會有變化,，必要時可用紫外檢測A260nm，找出濃度zui大的管號。
(5) 凝膠的再生和回收
凝膠柱使用一次后,，必須反沖疏松一次,，平衡后再使用。若使用數(shù)次,，就需要再生處理,。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡，然后用蒸餾水洗至中性備用,。若實驗完畢,，將再生后的凝膠在布氏漏斗上用蒸餾水洗滌抽干，再用95%乙醇洗兩次,，在60℃烘箱中烘干,，回收保存。