小鼠I型膠原C端肽(CTX-I)Elisa試劑盒說明書

檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法,。用抗小鼠CTX-I抗體包被于酶標(biāo)板上,，實驗時標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品中的CTX-I會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去,。依次加入生物素化的抗小鼠CTX-I抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素,。抗小鼠CTX-I抗體與結(jié)合在包被抗體上的小鼠CTX-I結(jié)合,、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),，TMB在辣根過氧化物酶的催化下現(xiàn)藍(lán)色,，加終止液后變黃。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值,，CTX-I濃度與OD₄₅₀值之間呈正比,，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CTX-I的濃度。

標(biāo)本收集:

1. 血清：全血標(biāo)本于室溫放置2小時或4℃置夜后于1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管,。

2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA.Na2,，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測,。避免使用溶血,，高血脂標(biāo)本。

3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融,。zui后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘,，取上清檢測,。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片,。取上清檢測,。

5. 其它生物標(biāo)本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測

6. 標(biāo)本應(yīng)清澈透明,，懸浮物應(yīng)離心去除,。

7. 標(biāo)本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝,，凍存于-20℃/-80℃冰箱內(nèi),，避免反復(fù)凍融，1-6月內(nèi)檢測,4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測,。

8. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值,，請根據(jù)實際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗,，以確定稀釋倍數(shù)),。

小鼠I型膠原C端肽(CTX-I)Elisa試劑盒說明書

注意事項：

1. 保存：試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中,。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染,，否則可能會出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。

1. 酶標(biāo)板：剛開啟的酶標(biāo)板孔中可能會有少許水樣物質(zhì),，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響,。
2. 加樣：加樣或加試劑時,，*個孔與zui后一個孔的加樣時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時間,，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。每次的加樣時間控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔,。
3. 溫育：為防止樣品蒸發(fā),，實驗時必須給酶標(biāo)板覆膜；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,，避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài),；嚴(yán)格遵守給定的溫育時間和溫度。
4. 洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干,，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,。在讀數(shù)前要注意清除底部殘留的液體和手指印，以免影響酶標(biāo)儀讀數(shù),。
5. 試劑配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate體積較小,，運(yùn)輸過程會使液體沾到管壁或瓶蓋,，因此使用前1000轉(zhuǎn)/分離心1min，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。取用前,，請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。標(biāo)準(zhǔn)品,、生物素化抗體工作液,、酶結(jié)合物工作液請根據(jù)所需用量配制，并使用相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆,。請配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab時,，一次不要小于10μL）,，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品,、生物素化抗體工作液,、酶結(jié)合物工作液。若需要分次使用標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)按照每一次用量分裝,，將其放在-20～-80℃貯存,。避免反復(fù)凍融。
6. 顯色時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如每隔5分鐘）,，如梯度已很明顯,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免顏色過深影響酶標(biāo)儀讀數(shù),。
7. 底物：底物請避光保存,，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
8. 混勻：充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要,，使用微量振蕩器(使用zui低頻率),，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕敲擊酶標(biāo)板框混勻,。
9. 安全：試驗中請穿著實驗服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作,。特別是檢測血液或者其他體液標(biāo)本時，請按國家生物試驗室安全防護(hù)條例執(zhí)行,。
10. 不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）
11. 試驗中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁混用,，否則將影響試驗結(jié)果,！

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