ELISA中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法

ELISA 試驗(yàn)以靈敏度較高,、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意,，有可能導(dǎo)致顯色不全,、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā),，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

下面分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,，并給出相應(yīng)的解決辦法

1. 選擇試劑

選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘,。

2 加樣

可能原因：① 血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；② 手工操作中,，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)),；③ 加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。解決辦法：① 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后,，再用3000rmp離心15分鐘,；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,，放置一段時(shí)間后,，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè),，可放在2-8℃冰箱中,，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi),。② 加樣后及時(shí)放入孵箱,。③加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。④ 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。⑤標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作,。

3. 孵育

可能原因：①孵育時(shí)未貼封片或加蓋,，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁,，難于清洗*,；② 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?，難以清洗*,。解決辦法：① 貼封片或加蓋；② 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。

4. 洗板

可能原因：①采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉,。② 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*,；洗板針堵塞,，抽吸不*；洗板不暢,，導(dǎo)致洗板效果差,。③ 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。解決辦法：① 保證洗液注滿各孔,，洗板針暢通,，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干,；② 合理安排,，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。

5. 顯色

可能原因：①顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑,；②加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流,。解決辦法：① 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；② 加樣時(shí)保持顯色劑不外流,；③  A,、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。

6. 終止

可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加,。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

7. 讀板

如讀板時(shí)板底不清潔等,。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔,。

所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸；盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,，有效提高檢測(cè)質(zhì)量,。

在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外,，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè),、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用,。