胎牛血清的相關(guān)問題

上海慧穎生物科技有限公司

近在培養(yǎng)細(xì)胞中使用胎牛血清,由于發(fā)現(xiàn)有沉淀,不知是否變質(zhì),在查閱相關(guān)文獻(xiàn)也沒有得到確切的答案.因此不敢再用原來的血清,導(dǎo)致浪費(fèi).在這提醒大家做細(xì)胞培養(yǎng)時,要注意血清的分裝.
血清是細(xì)胞培養(yǎng)中zui重要的元素之一,。在實(shí)驗(yàn)室操作中要注意及處理方法：
1. 血清保存: 建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃,。然而，若存放于4℃時,，請勿超過一個月,。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍,。
2. 解凍血清的方法: 建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解,，然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。
3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,，并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙枞倪^濾膜,。
4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮,，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究,，培養(yǎng)ES細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時,，推薦使用熱滅活血清,。
5. 有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多,，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,，像是“小黑點(diǎn)”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37℃環(huán)境中,，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。
因此我們建議您,，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步,。如此一來,，不但節(jié)省您寶貴的時間，更確保血清的質(zhì)量!
6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?
胎牛血清沒有預(yù)老化,，儲存在2－8℃時,，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在－20℃儲存胎牛血清,，避免反復(fù)凍融,。
7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
解凍血清時,，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生,。
請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,，血清會變得混濁,，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要,，可以無須做此步驟。
若必須做血清的熱滅活,，請遵守56℃,，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻,。溫度過高,，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多,。