胎牛血清的相關(guān)問題

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近在培養(yǎng)細胞中使用胎牛血清,由于發(fā)現(xiàn)有沉淀,不知是否變質(zhì),在查閱相關(guān)文獻也沒有得到確切的答案.因此不敢再用原來的血清,導(dǎo)致浪費.在這提醒大家做細胞培養(yǎng)時,要注意血清的分裝.
血清是細胞培養(yǎng)中zui重要的元素之一,。在實驗室操作中要注意及處理方法：
1. 血清保存: 建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。然而,，若存放于4℃時，請勿超過一個月,。若您一次無法用完一瓶,，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍,。
2. 解凍血清的方法: 建議您將血清從冷凍箱取出后,，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是,，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中,，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量,。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng),。激活的補體參與溶解細胞事件,，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細胞和巨噬細胞,。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細胞,，昆蟲細胞和平滑肌細胞時,，推薦使用熱滅活血清。
5. 有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,，或*沒有任何作用,，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,，像是“小黑點”,，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中,，又會使此沉淀物更增多,，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您,，若非必須,，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,，不但節(jié)省您寶貴的時間,，更確保血清的質(zhì)量!
6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?
胎牛血清沒有預(yù)老化,，儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素,、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量,。推薦在－20℃儲存胎牛血清,，避免反復(fù)凍融。
7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
解凍血清時,，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。
解凍血清時,，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生,。
請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,，血清會變得混濁,，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量,。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要，可以無須做此步驟,。
若必須做血清的熱滅活,，請遵守56℃，30分鐘的原則,，并且隨時搖晃均勻,。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻,，都會造成沉淀物的增多,。