人抗甲狀腺過氧化物酶抗體ELISA試劑盒Kit|TPO-Ab說明書

產(chǎn)品名稱：人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）ELISA試劑盒

別名：人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）ELISA檢測試劑盒,；人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）ELISA酶免試劑盒；人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）ELISA Kit

英文名稱：Human anti-Thyroid-Peroxidase antibody （TPO-Ab） ELISA Kit

規(guī)格：96T*1

檢測范圍：0.1 mIU/L -4 mIU/L 

試劑盒保存：4°C

有效期：一年

預期應用：ELISA法定量測定人血清,、血漿,、細胞上清液、尿液,、體液,、灌洗液、腦脊髓,、心房水,、胸房水、組織等其它相關(guān)液體中TPO-Ab含量,。

實驗原理：本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）水平,。用純化的人甲狀腺過氧化物酶（TPO-Ab）抗原包被微孔板,，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）,，再與HRP標記的抗甲狀腺過氧化物酶（TPO-Ab）抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）濃度,。

試劑盒組成：

操作步驟：

1,、標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*,、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,，混勻,；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為3mIU/L，2 mIU/L ,，1 mIU/L,，0.5 mIU/L， 0.25 mIU/L）,。

2,、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3,、  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4,、  配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。

5、  洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6,、  加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

7,、  溫育：操作同3。

8,、  洗滌：操作同5,。

9、  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10、            終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11、            測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。

注意事項：

1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2,、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。

3,、各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4、請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6,、底物請避光保存。

7,、嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8、所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9、本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。

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