大鼠肌鈣蛋白Ⅰ（Tn-Ⅰ）elisa試劑盒使用說明書

注：本試劑盒僅供研究使用，以下為中文說明書,，僅供參考,，請以隨貨英文說明書為準。

檢測范圍：7.5pg/ml - 1200pg/ml

方法：雙抗夾心法,；兩步法,；酶免elisa法

保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月

使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿,、細胞上清液,、細胞裂解液、尿液,、體液,、灌洗液、腦脊髓,、心房水,、胸房水、組織等相關(guān)液體樣本中肌鈣蛋白Ⅰ（Tn-Ⅰ）含量,。

實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠肌鈣蛋白Ⅰ（P-Tn-Ⅰ）水平,。用純化的大鼠肌鈣蛋白Ⅰ（Tn-Ⅰ）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入肌鈣蛋白Ⅰ（Tn-Ⅰ）,，再與HRP標記的肌鈣蛋白Ⅰ（Tn-Ⅰ）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的肌鈣蛋白Ⅰ（Tn-Ⅰ）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠肌鈣蛋白Ⅰ（Tn-Ⅰ）濃度,。

試劑盒組成：

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

1）準備試劑盒,，樣品和標準品

2）加入準備好的樣品和標準品,，37°C反應(yīng)30分鐘

3）洗板5次，加入酶標試劑,，37°C反應(yīng)30分鐘

4）洗板5次,，加入顯色液A，B,，37°C顯色10分鐘

5）加入終止液

6）15分鐘內(nèi)讀OD值

計算：

  以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。

注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。