大鼠（IL-10）elisa試劑盒操作原理|說明書

本試劑盒僅供研究使用。 

規(guī)格：96T

檢測范圍：0.5pg/ml - 64pg/ml

使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中白細胞介素10（IL-10）含量,。

適合樣本：大鼠血清,、血漿、細胞上清液,、細胞裂解液,、尿液、體液,、灌洗液,、腦脊髓、心房水,、胸房水,、組織等。

實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠白細胞介素10（P-IL-10）水平,。用純化的大鼠白細胞介素10（IL-10）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素10（IL-10）,，再與HRP標記的白細胞介素10（IL-10）抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素10（IL-10）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中大鼠白細胞介素10（IL-10）濃度。

試劑盒組成：

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

操作程序總結：

1）準備試劑盒,，樣品和標準品

2）加入準備好的樣品和標準品,，37°C反應30分鐘

3）洗板5次，加入酶標試劑,，37°C反應30分鐘

4）洗板5次,，加入顯色液A，B,，37°C顯色10分鐘

5）加入終止液

6）15分鐘內讀OD值

7）計算

計算：

  以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度,。

注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內,，如標本數量多，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。

保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

2．有效期：6個月