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產(chǎn)品名稱(chēng):人(Human)白細(xì)胞介素17(IL-17)ELISA試劑盒
別名:人白細(xì)胞介素17(IL-17)ELISA檢測(cè)試劑盒,;人白細(xì)胞介素17(IL-17)ELISA酶免試劑盒
英文名稱(chēng):Human Interleukin 17 (IL-17) ELISA Kit
規(guī)格:96T*1
檢測(cè)原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),。往預(yù)先包被白細(xì)胞介素17(IL-17)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素17(IL-17)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度,。
樣品收集,、處理及保存方法:
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
自備物品:
1. 酶標(biāo)儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項(xiàng):
1. 試劑盒保存在2-8℃,,使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為0 的S0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白,;按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5 倍,,zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實(shí)際濃度。
4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作,。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成:
名稱(chēng) 96孔配置 48孔配置 備注
微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無(wú)
樣本稀釋液6mL 3mL 無(wú)
檢測(cè)抗體-HRP 10mL 5mL 無(wú)
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A 6mL 3mL 無(wú)
底物B 6mL 3mL 無(wú)
終止液6mL 3mL 無(wú)
封板膜2 張2 張無(wú)
說(shuō)明書(shū)1 份1 份無(wú)
自封袋1 個(gè)1 個(gè)無(wú)
注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0,、3,、6、12,、24,、48 pg/mL
試劑的準(zhǔn)備:
20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20 稀釋?zhuān)? 份的20×洗滌緩沖液加19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,,每孔加滿(mǎn)洗滌液,,靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,,如此洗板5 次,。
2. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,,洗板5 次,。
操作步驟:
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,,再加樣本稀釋液40μL,;空白孔不加,。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,,用封板膜封住反應(yīng)孔,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5. 棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板5 次(也可用洗板機(jī)洗板),。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL,,37℃避光孵育15min,。
7. 每孔加入終止液50μL,15min 內(nèi),,在450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值,。
結(jié)果判斷:
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):在Excel 工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),,對(duì)應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo),,繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn),按曲線(xiàn)方程計(jì)算各樣本濃度值,。
試劑盒性能:
1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值,,大于等于0.9900。
2. 靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于0.1 pg/mL,。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng),。
4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%,。
5.貯藏:2-8℃,,避光防潮保存。
6. 有效期:6 個(gè)月
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