Caco2結(jié)腸癌細(xì)胞系（株）傳代基本技術(shù)

1. 選用細(xì)胞生長狀態(tài)好（80－90％）,，生長數(shù)量大于5×105 的細(xì)胞進(jìn)行傳代。

2. 吸除細(xì)胞培養(yǎng)液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶2 次,。加入1ml 消化液至細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，輕輕搖動(dòng)，使細(xì)胞消化液剛剛覆蓋細(xì)胞表面,。注：消化液配比為：0.25％胰蛋白酶＋0.02％EDTA,。

4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2、95%空氣,、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)數(shù)分鐘后,，在顯微鏡下觀察細(xì)胞的消化狀態(tài)。

注意：若貼壁細(xì)胞逐漸趨于圓形,、部分懸浮后,，即可用手指輕輕拍打細(xì)胞培養(yǎng)瓶側(cè)部或底部使大部分貼壁細(xì)胞脫落，之后立即加入細(xì)胞終止液,，終止細(xì)胞消化,。每種細(xì)胞的消化時(shí)間有差異，消化時(shí)注意觀察,，不要消化太久,。

5. 吹打培養(yǎng)瓶中懸浮細(xì)胞若干次，吸出細(xì)胞懸浮液,，轉(zhuǎn)入15ml 離心管中,，

1000rpm 離心5 分鐘。

6. 棄離心管中上清液,，加入細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,。細(xì)胞計(jì)數(shù)，確定細(xì)胞數(shù)量,。

7. 細(xì)胞分瓶后,，加入適量細(xì)胞培養(yǎng)液至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于5%CO2,、95%空氣,、37℃ 培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24 小時(shí)。

來源：慧穎生物實(shí)驗(yàn)室

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