Caco2結腸癌細胞系（株）傳代基本技術

1. 選用細胞生長狀態(tài)好（80－90％）,，生長數(shù)量大于5×105 的細胞進行傳代。

2. 吸除細胞培養(yǎng)液,。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細胞培養(yǎng)瓶2 次,。加入1ml 消化液至細胞培養(yǎng)瓶，輕輕搖動,，使細胞消化液剛剛覆蓋細胞表面,。注：消化液配比為：0.25％胰蛋白酶＋0.02％EDTA。

4. 將細胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2,、95%空氣,、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)數(shù)分鐘后，在顯微鏡下觀察細胞的消化狀態(tài),。

注意：若貼壁細胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后,，即可用手指輕輕拍打細胞培養(yǎng)瓶側部或底部使大部分貼壁細胞脫落,，之后立即加入細胞終止液，終止細胞消化,。每種細胞的消化時間有差異,，消化時注意觀察，不要消化太久,。

5. 吹打培養(yǎng)瓶中懸浮細胞若干次,，吸出細胞懸浮液,，轉入15ml 離心管中，

1000rpm 離心5 分鐘,。

6. 棄離心管中上清液,，加入細胞培養(yǎng)液重懸細胞。細胞計數(shù),，確定細胞數(shù)量,。

7. 細胞分瓶后，加入適量細胞培養(yǎng)液至細胞培養(yǎng)瓶中,，置于5%CO2,、95%空氣、37℃ 培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24 小時,。

來源：慧穎生物實驗室

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