產(chǎn)品名稱：人甲胎蛋白（AFP）ELISA試劑盒

方法：ELISA定量

規(guī)格：96T

產(chǎn)地：美國* 若想知道品牌請致電： ,！

一,、試劑盒的組成

1．兔抗AFP包被的微孔板：96孔，1塊,；

2．零緩沖液：1瓶,，13mL；

3．凍干參照標(biāo)準(zhǔn)品：1套（0,，20,，50，150,，500和1000ng/mL）,；

4．酶聯(lián)試劑：13 mL；

5．TMB試劑（一步）：1lmL,；

6．終止液（1N HGL）：1lmL,。

二、自備材料

1．精密吸管：0.02,，0.05,，0.10，0.15，0.20和1.0mL,；

2．一次性吸管吸頭,；

3．蒸餾水；

4．渦旋混合器或等同物,；

5．吸水紙或紙巾,；

6．坐標(biāo)紙；

7．酶標(biāo)儀,。

三,、樣品的采集和制備

    按規(guī)定的醫(yī)學(xué)技術(shù)要求從獲得的全血樣品中制備血清，此試劑盒僅使用血清樣品,，且無任何添加劑,。

四、試劑盒的保存和儀器

未啟封的試劑盒須保存在2~8℃的環(huán)境下,；微孔板存放在有干燥劑的密封袋里,，以盡量減少其在潮濕空氣中的暴露；已啟封的試劑盒在上述保存條件下,，在有效期內(nèi)可保持穩(wěn)定,。用酶標(biāo)儀在450nm處測定吸收值時，要求譜寬≤10nm,，光密度值O.D.在0~2間或更大些,。

五、試劑準(zhǔn)備

1．檢測前使所有試劑達(dá)到室溫（18~25℃,，下同）,。

2．用0.5mL蒸餾水溶解每個凍干的標(biāo)準(zhǔn)品（至少需20分鐘）并輕輕混合。已溶解的標(biāo)準(zhǔn)品須在2~8℃下密封保存,。

六,、檢測步驟

1．把所需數(shù)量的微孔固定在支架上。

2．分別吸取10µL標(biāo)準(zhǔn)品,、樣品和稀釋對照品加入相應(yīng)微孔,。

3．將100µL零緩沖液分別加入到每個微孔中。

4．充分混合30秒鐘（此步充分混合至關(guān)重要）,。

5．室溫溫育30分鐘。

6．翻轉(zhuǎn)微孔架,，棄掉溫育混合物,。

7．用蒸餾水或去離子水沖洗微孔5次。

8．在吸水紙或紙巾上扣擊微孔板以*除去微孔中殘余的水滴,。

9．向每個微孔中分別加入100µL的酶聯(lián)試劑,，輕輕混合5秒鐘。

10．室溫溫育30分鐘。

11．翻轉(zhuǎn)微孔架,，棄掉溫育混合物,。

12．用蒸餾水沖洗微孔5次（請勿使用自來水）。

13．在吸水紙上扣擊微孔板以除去殘余的水滴,。

14．向每個微孔中分別加入100µL的TMB試劑,，輕輕混合5秒鐘。

15．室溫溫育20分鐘,。

16．向每個微孔加入100µL終止液（1N HCL）終止反應(yīng),。

17．輕輕混合30秒鐘（此步對確保藍(lán)色*變成黃色至關(guān)重要）。

18．在15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450m處讀出光密度值,。 

七,、結(jié)果計算

1．計算出每個參照標(biāo)準(zhǔn)品、樣品,、對照品和患者樣品的平均吸收值（A450）,。

2．以每個參照標(biāo)準(zhǔn)品的平均吸收值作縱軸（Y），濃度值（ng/mL）作橫軸（X）在坐標(biāo)紙上繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

3．根據(jù)每個樣品的平均吸收值,，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出相應(yīng)的AFP濃度值（ng/mL）。

八,、標(biāo)準(zhǔn)曲線實例

    在450nm處以Y軸上顯示的吸收值,，X軸上顯示的AFP濃度值得出典型的標(biāo)準(zhǔn)曲線。此標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于說明,，不能用于計算未知樣品,。每個使用者應(yīng)根據(jù)自己的數(shù)據(jù)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 

九,、期望值和靈敏度

 在高?；颊哐逯校帽驹噭┖兴鶞y得的AFP值在100~350ng/mL之間可診斷為肝細(xì)胞癌,。其AFP水平超過350ng/mg,，通常表明已患病。大約97％的健康受試者AFP水平低于8.5ng/mL,。本試劑盒可檢測的AFP的zui小濃度為2.0ng/mL,。