人胃癌細胞MKN-45復(fù)蘇方法
慧穎生物熱賣細胞：

人源 人腎透明細胞腺癌細胞786-O 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基,；10%胎牛血清；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人源 人肝細胞HL-7702[L-02] 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基,；10%胎牛血清,；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人源 人胃癌細胞MKN-45 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基；10%胎牛血清,；1%雙抗 貼壁和少量懸浮生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人源 人急性T淋巴細胞白血病細胞Jurkat 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 RPMI1640培養(yǎng)基,；15%胎牛血清；1%雙抗 懸浮生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人源 人前列腺癌細胞DU 145 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 MEM培養(yǎng)基,；10%胎牛血清,；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人源 人神經(jīng)母細胞瘤細胞SK-N-SH 1×10?cells T25培養(yǎng)瓶 MEM培養(yǎng)基；10%胎牛血清,；1%雙抗 貼壁生長 提供STR鑒定報告 37 常溫

人胃癌細胞MKN-45復(fù)蘇方法

1,、提前打開水裕鍋，加熱到37度,，從液氮 罐中取出需要復(fù)蘇的細胞,；

2、放水裕鍋快速解凍(中途不要隨意拿出凍 存管直到凍存管中的液體全部融化)準備細 胞專用培養(yǎng)基和無菌離心管培養(yǎng)基需提前預(yù) 熱

3,、用完培稀釋凍存管中的細胞懸液至離心 管中收集細胞至元南離心管,，800-1100 rp/5min，取出離心管,，管底可見細胞沉淀

4,、去除上清,，用5ml完培重懸離心管中的 細胞液至T25瓶中，十字搖晃均勻,；放入培 養(yǎng)箱,，隔天觀察

傳代
1、準備所需耗材紫外消毒30分鐘,，觀察細胞密度 80%即可傳代,； 2、去掉舊培養(yǎng)基,，加入3mIPBS緩沖液輕輕潤洗后去 除,，加入1ml胰酶，均勻覆蓋細胞表面(胰酶需提前預(yù) 熱),； 3,、細胞消化至變圓，輕拍瓶身滑落.加入4ml完培終 止消化,，收集消化下來的細胞至無菌離心管,， 800-1100 rpm/5min 4、取出離心管,，管底可見細胞沉淀,，準備兩個T25瓶 ,各加入2.5ml培養(yǎng)基； 5,、離心管內(nèi)去上清,，用5ml完培重細胞懸液，分裝至 2個T25瓶,，十字搖晃均勻放入培養(yǎng)箱,，隔天觀察；

特殊細胞收到注意事項

部分細胞由于貼壁不牢在運輸過程中發(fā)生細胞脫落,，這是正常現(xiàn)象正確處理后都可以正常生長,。 1,、將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細胞（1200rpm3-5min）去除舊培養(yǎng)基,； 2,、用PBS重懸細胞，將所有細胞收集到一個離心管中,，再次離心（1200rpm3-5min）去除PBS,； 3、加入1ml左右0.25%胰酶重懸細胞,，混勻即可,，不能吹打太多次,，放入培養(yǎng)箱消化，根據(jù)細胞特性決定消化時間（約1~2分鐘） 4,、消化好后,，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散,，迅速加入3-5ml培養(yǎng)基混勻以終止消化,，離心 （1200rpm3-5min） 去除胰酶； 5,、加入5ml左右的細胞相應(yīng)的培養(yǎng)基混勻,，按比例接入無菌培養(yǎng)瓶/皿中； 6,、顯微鏡下觀察看細胞是否成均勻分散的單顆細胞,，若有3-5個成團的小細胞團可不用重新消化，使之貼壁后待細胞生長穩(wěn) 定后再消散細胞,。