Question如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損,？

將血清從冷凍箱取出后,，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是,，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

長時間儲存在2-8℃時,，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素,、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。因此,，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復(fù)凍融,。

我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃,。若存放于4℃時，請勿超過一個月,。若一次無法用完一瓶,，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

 

Question血清中包含沉淀物,，它們是什么,，怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,，不會影響產(chǎn)品性質(zhì),。要除去沉淀，離心血清(400g,，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾),。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,，沉淀會自然消失。

 

Question如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

(1)解凍血清時,，請隨時將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生,。

(2) 血清分裝凍存時,，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一,。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀,。

(4) 勿將血清置于37℃太久,，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,，從而影響血清的品質(zhì),。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要,，可以無須做此步驟,。

(6) 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃,，30分鐘的原則,，并且隨時搖晃均勻。溫度過高,，時間過久或搖晃不均勻,，都會造成沉淀物的增多。

Question 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎?

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它,。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

 

實驗顯示,，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),，或*沒有任何作用,，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,，像是“小黑點(diǎn)”,，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中,，又會使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

若非必須,，可以不需要做熱處理這一步,。不但節(jié)省時間，更確保血清的質(zhì)量!

Question血清中包含沉淀物,，它們是什么，怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,。這是正常特性,，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,，離心血清(400g,，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾),。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,，沉淀會自然消失。

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮,，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究,，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時,，推薦使用熱滅活血清,。

 

一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先,，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài),，黑點(diǎn)是否游動,。如果細(xì)胞被污染，微生物則會大量繁殖,，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁,。污染包括細(xì)菌污染,、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細(xì)胞,，生長狀態(tài)良好,，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化,，那么,，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：

(1)細(xì)胞生長過老，破碎的細(xì)胞殘骸;

(2)血清質(zhì)量不好,，反復(fù)凍融的結(jié)果;

(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,，不宜細(xì)胞生長;

(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格,?？蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn);

(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),，可能是原代組織中的雜質(zhì),，多次傳代可以消除。