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當(dāng)前位置:上?;鄯f生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>MLE-12細胞,,小鼠肺泡上皮細胞 傳代說明
細胞名稱:MLE-12小鼠肺泡上皮細胞
貨號:M009
種屬:小鼠
細胞來源:從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進
生長特性:貼壁 上皮樣
培養(yǎng)條件:培養(yǎng)基:DMEM(H)+10%FBS(推薦使用HAKATA優(yōu)等胎牛血清HN-FBS-50)
溫度:37℃
氣相:95%空氣,,5%二氧化碳
傳代說明:
1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒,,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,,打開瓶口,,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),,根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代,,一般2到3天換一次液;
2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,,需要對其進行傳代,,傳代比例為1:3到1:8;
3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,,往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去,。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶,,置于37°孵育消化(次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為*消化時間,,記錄*消化時間,,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化,。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,,使之*脫落,然后收集細胞懸液,,1200rpm離心3min,,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細胞,,進行傳代,。
保存說明:
凍存條件:80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO
(備注:建議使用本公司的冷凍液(H-W-100),用4度保存的冷凍液直接重懸細胞,,不能預(yù)熱后使用,。)
保存條件:液氮存儲
常見問題說明:
1.培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細胞極大可能會污染,,所以我們會及時安排幫老師解決,。
2.收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加 10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過 72 小時)
3.細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱,。1-2小時后觀察,,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,,剩余漂浮的細胞可以去掉,,留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細胞生長至匯合度80%,,進行消化傳代,;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),,中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),,直到問題解決,。
供應(yīng)商:慧穎細胞庫 人源均來自于第三方str鑒定,請放心購買
供應(yīng)限制:僅供科研使用
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