小鼠正常乳腺上皮細胞培養(yǎng)方法

產(chǎn)品名稱：小鼠正常乳腺上皮細胞

培養(yǎng)條件：1640培養(yǎng)基+10% FBS

2天換液一次,，1:2傳代  3-4天傳代一次

產(chǎn)品供應(yīng)商：上?；鄯f生物科技有限公司

1、收到細胞,，請查看瓶子是否有破裂,，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快,。

2,、收到細胞，如包裝完好,，請在顯微鏡下觀察細胞,。,由于運輸過程中的問題，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況,，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要打開細胞培養(yǎng)瓶,，先不要把培養(yǎng)基吸出來,。應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右,，讓細胞先穩(wěn)定下,，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁,。如細胞仍不能貼壁,，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理

3. 收到細胞時如無異常情況 ,，請在顯微鏡下觀察細胞密度,，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時,，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水,。噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作：然后打開蓋子,，先用槍頭把培養(yǎng)基吸出10ML左右,，放在離心管里，然后瓶口過火,，（嚴禁直接傾倒）,，這樣可以保證不污染，再用10ML的移液管,，將剩余的培養(yǎng)基全部吸出,，放于離心管中，培養(yǎng)瓶中只剩余5-10ML左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了）：超過80%匯合度時,，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。

如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液,，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3-5分鐘,，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

4,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,，存放于4℃冰箱,，以備不時之需。第二天換液時,，要配制新鮮的培養(yǎng)基和進口胎牛血清,。這樣對細胞生長更好。不要再用我們原瓶的培養(yǎng)基了,。

5 ,、24小時后，細胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,，就可以傳代了,。（貼壁細胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS或Hanks’液洗滌后棄去,。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化,，消化時間以具體細胞為準，一般1-3分鐘,，不超過5分鐘,。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化,。輕輕晃動瓶壁,，見細胞脫落下來，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化,。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞,，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,，1000rpm/5min,。棄上清，視細胞數(shù)量決定分瓶數(shù),，一般一傳二,，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過稀,，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶,，以具體細胞和經(jīng)驗為準。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁,，直接將溶液吸入離心管離心即可,。

6，貼壁細胞 ，懸浮細胞,。嚴格無菌操作,。換液時，換新的細胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液和進口胎牛血清,，37度    5%CO2 培養(yǎng)

7.  收到細胞后,，請鏡下觀察細胞，用恰當(dāng)方式處理細胞,。若懸浮的細胞較多,，請離心收集細胞，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中,。棄掉原液,，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進口胎牛血清. 剛接到細胞,，若細胞不多時 血清濃度可以加到15％去培養(yǎng),。若細胞迏到80%左右 ，血清濃度還是在10％,。

                                                      細胞培養(yǎng)條件

1,，1640培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11875093） +10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+2mM  L-G(L-谷氨酰胺)+1mM  Sodium pyruvate+10mM   HEPES(gibco.,。貨號,。15630-080)

2,DMEM高糖培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11995065）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+4mM  L-G(L-谷氨酸胺)+1mM （丙酮酸鈉1,HEPES(gibco.。貨號,。15630-080)

3,E,MEM培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11095080）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+NEAA(非必需氨基酸)+2mM  L-G(L-谷氨酸胺)+1mM （丙酮酸鈉）

4,，F(xiàn)12K培養(yǎng)基 （GIBCO,貨號11765054）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+2mM  L-G(L-谷氨酸胺)

5，McCoy's 培養(yǎng)基（GIBCO,貨號16600082）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

6 . L 15培養(yǎng)基（Hyclone,貨號SH30525.01）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

1. DMEM/F12培養(yǎng)基（GIBCO,貨號11330032）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

8. IMDM培養(yǎng)基（GIBCO,貨號C12440500BT）+10%進口胎牛血清（GIBCO,貨號10099141）+1.5mM  L-G(L-谷氨酸胺)

2, L-G(L-谷氨酸胺),。L-Glutamine 200mM  (GIBCO,。貨號25030-081)

3,NEAA(非必需氨基酸).(GIBCO。貨號11140-050)

4..sodium.pyruvate  (GIBCO,。貨號11360-070)   

100ML 1640*培養(yǎng)基配法
1640培養(yǎng)基   86ML  

 FBS 血清        10ML       

 L-谷氨酸胺,。100X  1ML
丙酮酸鈉  100X        1ML

HEPES(1M) 10mM  1ML   

抗菌素（青、鏈霉素） 1ML