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牛精液冷凍保存是將精液進行特殊處理,,保存在超低溫下,以達到長期保存的目的,。通常采用液氮(-196℃)和干冰(-79℃)保存,。
牛精液冷凍保存的優(yōu)點:使用不受時間、地域以及種用雄性動物壽命的限制,??沙浞痔岣呃寐省?/p>
低溫保存細胞的原理,,冷凍保護劑可以均勻充分地和細胞相接觸,,保護效果好。對組織而言,,保護劑只能作用于其表面,,對深層細胞無法起到保護作用。為了提高組織的存活率,,應同時控制降溫的速率,。控制降溫速率的慢速降溫可以使細胞外溶液中的水結冰,,導致細胞外溶液濃度升高,,胞內水向膜外滲出,在達到一定溫度時,,將組織置于灤低溫冰箱或液氮中凍存,,可以減輕細胞內結晶對細胞的損傷,保持細胞的活性,。
冷凍
在裝有液氮的容器上置一銅紗網,,距液氮面2厘米左右,。將平衡后的精液用滴管按一定量滴于銅紗網,滴完后一滴停3分鐘~5分鐘,,當精液顆粒顏色變白時,,立即浸入液氮,并將全部顆粒取下,,收集于儲精瓶或紗網布袋內,,并做好標記,然后立即移入液氮罐中儲存,。
解凍
將預先配制好的9%檸檬酸的溶液1毫升,,放入干凈的小試管中,再置于40℃左右的溫水杯中,,迅速取顆粒冷凍精液1粒放入試管,。輕輕搖動至化凍時,從水杯中取出試管,,接著檢查精液活力,,即為合格品。
重視保精,、快速解凍與鏡檢
1,、根據液氮罐的性能要求,定期添加液氮,,罐內盛裝凍精的提筒不能露在液氮外面,。
2、取精時,,盡可能用長鑷子,,切勿將提筒或紗布袋提到臨界線以上處(罐頂10厘米左右)。
3,、從液氮中取出細管凍精時,,要輕輕甩一兩下,將塑料細管的棉塞端放入35℃~40℃的溫水中,,把封口端留在水外3厘米外,,待管內精液融化一半時,立即取出備用,。
4,、解凍后的精液鏡檢時,精子的活力不低于標準方可用于輸精,,才能確保正常受精,。
5、解凍后的精液應立即輸配,,不宜停放時間過長,,應做到現解凍,,現輸精。
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