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Cy7熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒 (10~100 mg標(biāo)記量)
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 保存條件 |
Cy7熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒 | 標(biāo)記10~100 mg抗體/蛋白 | -20 ℃ |
一. 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Cy7熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒可以通過(guò)抗體/蛋白上的伯胺基團(tuán)（如賴(lài)氨酸）,，簡(jiǎn)單、快速地實(shí)現(xiàn)抗體/蛋白與熒光染料的共價(jià)偶聯(lián),。此為通用型試劑盒,，適合Cy7熒光標(biāo)記各種分子量不一致的抗體/蛋白。偶聯(lián)在30分鐘內(nèi)即可完成,，偶聯(lián)效率可達(dá)70%左右,。使用超濾管純化，可快速去除多余的Cy7熒光染料,，且不會(huì)損失抗體/蛋白,。
二. 試劑盒組成與存儲(chǔ)
收到后將Cy7-mix(含10 % Cy7染料)儲(chǔ)存在-20?C。Coupling Reagent,、Cy7-mix溶解液可在+4°C短期保存或-20°C長(zhǎng)期保存,。
試劑盒組成 | 數(shù)量 | 保存溫度 |
Cy7-mix (含10 % Cy7染料) | 10 mg | -20 ℃ |
Coupling Reagent | 2 mL | +4 ℃或-20 ℃ |
Cy7-mix溶解液 | 2 mL | +4 ℃或-20 ℃ |
超濾管 (3.5kD) | 2 支 | 室溫 |
三. 實(shí)驗(yàn)步驟
1. 取待標(biāo)記抗體/蛋白(1~10mg)，溶解于1 mL純水中,，加入100 μL Coupling Reagent,，混合均勻待用。
注：抗體/蛋白在1~10mg內(nèi)均用1mL純水溶解,，并加入100 μL Coupling Reagent,。超出此范圍，請(qǐng)按比例增減,，如0.5 mg抗體/蛋白,，建議使用0.5 mL純水溶解并加入50 μL Coupling Reagent。
(以下步驟按標(biāo)記1 mg抗體/蛋白為例)
2. 根據(jù)熒光標(biāo)記需求程度,，稱(chēng)取0.1 ~1 mg Cy7-mix固體加至第1步溶液,，充分混合溶解。
注：(a) 若Cy7-mix用量超出1 mg,，可能導(dǎo)致熒光標(biāo)記過(guò)量,，引起熒光部分淬滅;
(b) 若低于1 mg的Cy7-mix難以稱(chēng)取，可先取1 mg Cy7-mix固體溶解于100 μL Cy7-mix溶解液,，再按需取Cy7-mix溶液加至第1步溶液,。由于Cy7-mix溶解后易分解，溶液須盡快使用且不可保存,。
3. 室溫避光反應(yīng)30 min,，延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間不影響偶聯(lián)效率。
4. 將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至超濾管,，10000rpm超濾5min,，即可除去未反應(yīng)的Cy7-mix，為提,，可加入純水重懸抗體/蛋白,，重復(fù)超濾1~2次,。
5. 使用純水或PBS將超濾管截留下的抗體/蛋白重懸，即得到Cy7熒光標(biāo)記的抗體/蛋白溶液,。
四. 注意事項(xiàng)
1. 熒光標(biāo)記前抗體/蛋白中可能含有干擾組分,，建議低于以下比例:
干擾組分 | 建議比例 |
甘油 | < 50% |
NaN3 | < 0.1% |
含氨基的緩沖液（如Tris） | 0% |
pH | 7.0-8.5 |
伯胺（如氨基酸,、乙醇胺等） | 0% |
硫醇（如巰基乙醇,、DTT等） | 0% |
注：若以上干擾組分超出建議比例，可先通過(guò)超濾管或透析等方式除去干擾成分,，再使用本試劑盒進(jìn)行抗體/蛋白熒光標(biāo)記,。
2. 偶聯(lián)后的抗體/蛋白應(yīng)避光保存。通常在4℃下可保存6~12個(gè)月,。如需保存更長(zhǎng)時(shí)間,，可加入冷凍保護(hù)劑如50%甘油，在-20℃保存,。
