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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1451 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 外周血 | 種屬來源 | 人 |
| 生長(zhǎng)特性 | 半貼半懸浮 | 細(xì)胞形態(tài) | 圓形 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 人外周血單個(gè)核細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1451 |
組織來源 | 外周血 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 不增殖,；不傳代 |
生長(zhǎng)特性 | 半貼半懸浮 | 細(xì)胞形態(tài) | 圓形 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
人外周血單個(gè)核細(xì)胞分離自外周血,；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念,。外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)即外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞,，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。目前,，主要的分離方法是密度梯度離心法,，因?yàn)檠褐懈饔行纬煞值谋戎卮嬖诓町悾虼说靡苑蛛x出不同的細(xì)胞,。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：不傳代
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二,、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六、室溫1 000×g離心8min,，去上清液,。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min,，去上清液,。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min，4℃),，1000×g,，4℃離心10min,。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人淋巴瘤細(xì)胞,，Raji細(xì)胞
人淋巴母細(xì)胞,，T2 (174xcem.T2 )細(xì)胞
人淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞，A3細(xì)胞
人卵巢癌細(xì)胞胞,，CoC1細(xì)胞
人卵巢癌細(xì)胞,，3AO細(xì)胞
人卵巢癌細(xì)胞，A2780細(xì)胞
人卵巢癌細(xì)胞,，Caov3細(xì)胞
人卵巢癌細(xì)胞,，HO-8910細(xì)胞
人卵巢癌細(xì)胞，OV-90細(xì)胞
人卵巢癌細(xì)胞,，SK-OV-3細(xì)胞
人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞,，ES-2細(xì)胞
人卵巢腺癌細(xì)胞，OVCAR-3細(xì)胞
人慢性骨髓性白血病細(xì)胞系,，K562細(xì)胞
人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞,，KCL-22細(xì)胞
人膜間皮細(xì)胞，MET-5A細(xì)胞
弗氏鏈霉菌Streptomyces fradiae(Ganseetal.)YanetDeng
弗氏檸檬酸桿菌Citrobacter freundii
弗氏耶爾森菌Yersinia frederiksenii,Ursing et al.
弗氏志賀氏菌Shigella flexneri Castellani and Chalmers
弗氏志賀氏菌 GFPShigella flexneri GFP
弗托氏葡糖桿菌Gluconobacter frateurii
茯苓菌Wolfiporia cocos
輻毛鬼傘Coprinellus radians (Desm.) Vilgalys, Hopple & Jacq. Johnson
福氏志賀氏菌Shigella flexneri
腐敗梭菌Clostridium septicum (Mace) Ford
人外周血單個(gè)核細(xì)胞腐敗希瓦氏菌Shewanella putrefaciens
腐爛別樣桿菌Alistipes putredinis
腐皮鐮孢菌Fusarium solani
腐生葡萄球菌Staphylococcus saprophyticus (Fairbrother) Shaw et al.
腐生葡萄球菌腐生亞種Staphylococcus saprophyticus subsp. saprophyticus
原代細(xì)胞使用方法：
是一種半貼半懸浮細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈圓形,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
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