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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X2125 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 卵巢 | 種屬來(lái)源 | 兔 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞 |
詳細(xì)介紹
一,、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 兔卵巢內(nèi)膜細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X2125 |
組織來(lái)源 | 卵巢 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來(lái)源 | 兔 | 傳代特性 | 根據(jù)細(xì)胞特性 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形細(xì)胞,，不規(guī)則細(xì)胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
卵巢不僅是卵子產(chǎn)生,、生長(zhǎng)并成熟的器官,，也是腦垂體前葉分泌促性腺激的靶器官之一。卵巢分為內(nèi),、外側(cè)兩面,，其中，內(nèi)側(cè)面朝向盆腔,，多與回腸緊鄰,。 探明卵巢內(nèi)膜細(xì)胞的增值及內(nèi)分泌功能，在發(fā)情周期和妊娠期發(fā)生變化的機(jī)理及調(diào)控因素,，對(duì)進(jìn)一步研究卵泡發(fā)育的調(diào)控,、排卵、黃體形成和退化,、卵巢等發(fā)病機(jī)理,，以及在這些生理和病理過(guò)程中參與其中的激素及細(xì)胞因子作用機(jī)理均有重要意義。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二,、在超凈工作臺(tái)中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì),、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì)。
五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),。
客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm,，離心5min,，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm,，離心5min,，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí),，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn),；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定,。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠雜交瘤細(xì)胞,；D47-AF,IgA
小鼠雜交瘤細(xì)胞,；16DC9-A
小鼠雜交瘤細(xì)胞；T33-22A
小鼠雜交瘤細(xì)胞,；16BB5
小鼠雜交瘤細(xì)胞,；16CD11-G
小鼠雜交瘤細(xì)胞；16CF7
小鼠雜交瘤細(xì)胞,；16CD11-A
小鼠雜交瘤細(xì)胞,；I41-AG
小鼠雜交瘤細(xì)胞；19HC5
小鼠雜交瘤細(xì)胞,；16CF7-A5
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克?。?/span>CHO-HCV-C
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克?。?；CHO-HCV-E1
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克?。?/span>CHO-HCV-E2
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克?。?；CHO-HCV-p7
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克隆）,；CHO-HCV-NS2
營(yíng)養(yǎng)肉湯（NB）
Nutrient Broth
2216E瓊脂
2216E Agar
標(biāo)準(zhǔn)I號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂
Standard I Nutrient Agar
標(biāo)準(zhǔn)II號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂
Standard II Nutrient Agar
胰胨大豆胨固綠瓊脂
Tryptic Soy Fast Green Agar
兔卵巢內(nèi)膜細(xì)胞m-TGE肉湯
m-TGE Broth
水平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基
Water Plate Count Agar
R2A瓊脂
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