兔口腔黏膜上皮細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品：人腎小球系膜細(xì)胞HMC(STR鑒定正確)彼爾姆短桿菌Brevibacterium permense人卵巢癌細(xì)胞ES-2(STR鑒定正確)解芳烴卡斯特蘭尼氏菌Castellaniella defragrans人胃癌細(xì)胞SNU-1(STR鑒定正確)白酒紅鏈霉菌Streptomyces albovinaceus小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞P815（種屬鑒定）脆弱鏈霉菌Streptom

一,、細(xì)胞基本屬性：

 

包被條件： 

培養(yǎng)基：原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率：每2-3天換液一次

傳代比例：

消化液：0.25%胰蛋bai酶

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

原代細(xì)胞實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二,、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,，去除小腦和間腦,。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四,、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。

五,、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。

七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻,，1 000×g，20min,，4℃離心,，去上清,。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min。

十,、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫),，去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液。

原代細(xì)胞使用方法：

是一種貼壁細(xì)胞,，細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進行相關(guān)實驗,。

客戶收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,，1000rpm，離心5min,，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀,，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3)經(jīng)1000rpm,，離心5min，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4)待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱),。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理,。

4. 細(xì)胞實驗

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細(xì)胞貼壁性,，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）,，依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞；T24

人成骨肉瘤細(xì)胞,；Saos-2
人正常肝細(xì)胞,；L-02
人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞,；U937[U-937]
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人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞；Daudi
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小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞；P815
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人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞；769-P
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞,；COS-7
人腎腺癌細(xì)胞,；ACHN
人子宮頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞,；SiHa
Phosphate Buffered Saline
改良EC（mEC+n）肉湯
Modified EC Enrichment Broth
三糖鐵管
TSI
LST發(fā)酵管（含小倒管）
LST
EC肉湯（含小倒管）
EC Broth
煌綠乳糖膽鹽肉湯BGLB（含小倒管）
兔口腔黏膜上皮細(xì)胞Brilliant Green Lactose Bile Broth
雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管（含小倒管）
Double Lactose Bile Ferment Broth
單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管（含小倒管）
Lactose Bile Ferment Broth