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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X2123 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 乳腺組織 | 種屬來源 | 兔 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
詳細介紹
一,、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 兔乳腺上皮細胞 | 商品貨號 | A01X2123 |
組織來源 | 乳腺組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 可傳1-2代 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
細胞簡介 |
兔乳腺上皮細胞分離自乳腺組織,；乳腺是復管泡狀皮膚腺,，主要由腺上皮細胞組成，并具有特殊的泌乳功能,。在妊娠期,，導管末梢發(fā)育成腺泡；近年來的許多研究都表明乳腺癌,、乳腺炎等的發(fā)生都與乳腺上皮細胞(MEC)有密切聯(lián)系,，體外分離培養(yǎng)MECs即成為研究開展的關鍵步驟。乳腺是乳房的腺體組織,，乳腺由導管和腺泡組成,，腺泡是分泌乳汁的重要部分。乳腺的正常發(fā)育是由體內(nèi)激素和局部合成的生長因子共同調(diào)控,，其中乳腺表達的生長因子對乳腺上皮細胞的增殖,、分化、凋亡產(chǎn)生極大的影響。乳腺上皮細胞分離自分娩后3-5天的乳腺組織,，為貼壁生長型細胞,，呈多角形、圓形以及短梭形,；乳腺上皮細胞主要功能即生乳功能,。 |
包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,，保留大腦皮質(zhì),。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶,，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h,。
六,、室溫1 000×g離心8min，去上清液,。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min，4℃離心,，去上清,。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶,，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻,，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min，去上清液,。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g,，60min,，4℃)，1000×g,，4℃離心10min,。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min，室溫),，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,，隨后隔天換液,。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈上皮細胞樣,，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗,。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時,，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
家貓肺細胞；FCA-L1
家貓肺細胞,；FCA-L2
家貓皮膚細胞,；FCA-S1
小香豬皮膚細胞；SSC-S2
大耳山羊腎細胞,；LDG-2
大耳山羊皮膚細胞,；LDG-3
綿羊肺細胞；OAR-L1
大耳山羊肺細胞,；LDG-1
綿羊皮膚細胞,；OAR-S1
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞；COS-1
恒河猴腎細胞,；RM-2
馬鐵菊頭蝠肺細胞,；GHBL3
恒河猴腎細胞；RM-3
恒河猴皮膚細胞,；RM-S1
大額牛腎細胞,；BFR-K1
Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar
氯化鈉多素B肉湯基礎(SCPB)
Sodium Chloride Polymyxin Broth Base
我妻氏培養(yǎng)基基礎
Wagstsuma Agar Base
60g/L氯化鈉蛋白胨肉湯
60g%/L NaCl Peptone Water
氯化鈉三糖鐵
NaCl Triple Sugar Iron Agar
胰胨大豆瓊脂斜面（TSA）
兔乳腺上皮細胞Tryptic Soy Agar
42℃生長培養(yǎng)基
42℃growth Medium
O/F培養(yǎng)基(HLGB)
O/F Medium
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