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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X2124 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 乳腺組織 | 種屬來源 | 兔 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
詳細介紹
一,、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 兔乳腺成纖維細胞 | 商品貨號 | A01X2124 |
組織來源 | 乳腺組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 可傳5代左右,；3代以內狀態(tài)良好 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
包被條件：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細胞簡介 |
兔乳腺成纖維細胞分離自乳腺組織；乳腺位于皮下淺筋膜的淺層與深層之間,，淺筋膜伸向乳腺組織內形成條索狀的小葉間隔,，一端連于胸肌筋膜，另一端連于皮膚,，將乳腺腺體固定在胸部的皮下組織之中,。乳腺是哺乳動物少數(shù)可以重復經(jīng)歷生長、功能分化和退化過程的器官之一,。纖維結締組織伸入乳腺組織之間,，形成許多間隔，這些纖維結締組織對乳房起固定作用,，而纖維結締組織是由成纖維細胞構成的,。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來,。成纖維細胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動,，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的乳腺成纖維細胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁wan全,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團,；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長,，平坦、胞體較大,，細胞質透明,，細胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠,，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min,。
二、在超凈工作臺中,，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦,。
三,、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,。
四,、用細解剖鑷去除大腦白質,、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質,。
五,、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小,，放入50ml的離心管中,，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶,，200-400U DNaseI),，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六,、室溫1 000×g離心8min,，去上清液。
七,、沉淀中加入20％BSA重懸浮,，充分混勻，1 000×g,，20min,，4℃離心，去上清,。
八,、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶,，100-300U DNaseI )重懸浮,，混勻，37℃水浴消化0.5-1h,，700×g室溫離心6min,，去上清液。
九,、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min,，4℃),，1000×g，4℃離心10min,。
十,、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm,，6min,，室溫)，去上清液,。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS,，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃,、5％CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液,。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞,，細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣，在技術部標準操作流程下,，細胞可傳2-3代,；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,，請按照以下方法進行操作,。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身,，拆下封口膜,，放入37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻,，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液,，1000rpm,，離心5min，保留沉淀,；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min),；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min,，丟棄上清,，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內,；
4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱),。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理,。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片,、培養(yǎng)板,、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被,，以增強細胞貼壁性,，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ,，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定,。懸浮/半懸浮細胞無需包被,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆)；CHO-K1
小鼠胚胎細胞,；BABL/C-E
大長舌果蝠肌肉細胞,；DBM1
豚鼠肺細胞；GP-F1
豚鼠皮膚細胞,；GP-S1
豚鼠皮膚細胞,；GP-S2
小鼠肺成纖維細胞；WML2
豚鼠心肌細胞；GP-H1
豚鼠皮膚細胞,；GP-S3
敘利亞倉鼠肌肉細胞,；GH-M1
大鼠肺細胞；WTRL1
敘利亞倉鼠皮膚細胞,；GH-S1
小耳豬肺細胞,；SEP-L2
家豬皮膚細胞；SSC-S1
小耳豬肺細胞,；SEP-L1
粘液酸鹽測試肉湯
粘液酸鹽質控肉湯
煌綠肉湯增菌液基礎
Brilliant Green Enrichment Broth Base
亞酸鹽煌綠增菌液基礎
志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素
Shigella Broth
尿素瓊脂（PH7.2）
Urease Agar Base
muller-kaufmann氏四硫磺酸鈉肉湯
兔乳腺成纖維細胞Muller-kaufmann Tetrathionate Broth
大豆胰酪蛋白胨肉湯（含亞硫酸鐵）
Trypticase Soy Broth with Ferrous Sulfate
弧菌檢驗檢驗培養(yǎng)基
TCBS瓊脂
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